專利名稱：一種富硒毛頭鬼傘菌絲體及其菌粉的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，本發(fā)明還涉及了一種富硒毛頭鬼傘菌粉的制備方法。
背景技術(shù)：
硒(Se)是人體必需的一種微量元素，具有多種重要的生理功能，硒的攝入量不足與克山病、大骨節(jié)病、心血管疾病、腫瘤等許多疾病的發(fā)生有關(guān)。人體獲取硒主要從食物中吸收，食物來自于農(nóng)產(chǎn)品，農(nóng)產(chǎn)品從土壤中吸收硒，而土壤缺硒是世界上廣泛存在的問題， 地球土壤的自然含硒量一般也只有0. 1 2. 0 μ g/g，平均為0. 2 μ g/g。我國恰恰處在全球的缺硒帶。目前，補(bǔ)硒劑主要有兩類，一是無機(jī)硒，如亞硒酸鈉、硒酸鈉；二是有機(jī)硒，包括有機(jī)硒制劑、富硒地區(qū)出產(chǎn)的天然產(chǎn)物，以及人工生物轉(zhuǎn)化的各種動、植物和微生物產(chǎn)品。毛頭鬼傘(Coprinus comatus)是近年來人工開發(fā)生產(chǎn)的一種具有商業(yè)潛力的珍稀食用菌新品，其性平味甘，有益脾胃、清神寧智、增食欲及治療痔瘡等功效，還具有一定的降血糖、降血脂、提高免疫活性、抗腫瘤、抗病毒和抗菌等生物學(xué)功能，所以被聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)和世界衛(wèi)生組織(WHO)確定為集“天然、營養(yǎng)、保健”三種功能為一體的16種珍稀食用菌之一。硒是一種具有副作用的營養(yǎng)素，安全范圍較窄，有機(jī)硒的安全性遠(yuǎn)高于無機(jī)硒。近年來，對生物富硒的報道較多，真菌液體發(fā)酵過程有很強(qiáng)的富集、轉(zhuǎn)化微量元素的能力，更有價值的是無機(jī)形態(tài)的微量元素經(jīng)真菌吸收后，形成有機(jī)形態(tài)的元素。目前，作為有機(jī)硒制品富硒食用菌的研究和開發(fā)倍受關(guān)注，但是目前沒有對富硒毛頭鬼傘菌絲體及菌粉制備方法方面的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個目的旨在提供一種富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法。本發(fā)明的第二個目的是提供一種富硒毛頭鬼傘菌菌粉的制備方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)措施來實(shí)現(xiàn)的一種富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其包括以下步驟(1)取毛頭鬼傘菌菌種于斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)得到毛頭鬼傘菌斜面菌種；(2)取步驟(1)中的毛頭鬼傘菌斜面菌種接種到搖瓶培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床培養(yǎng)得到液體菌種；(3)取步驟⑵中所得的液體菌種轉(zhuǎn)接入含硒鹽的發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵至發(fā)酵液透明，氣味清香，按濕重計算菌絲體生物量為20 30g/L，pH為5 7時，停止發(fā)酵，得到富硒毛頭鬼傘菌絲體。本發(fā)明推薦的實(shí)施例是所述步驟(1)中的斜面培養(yǎng)基的配方為土豆150 300g，葡萄糖 15 30g，蛋白胨 1. 5 3g,KH2PO4I 3g,MgSO4 ·7Η200· 5 1. SgjVB1O. 01 0. 03g，瓊脂15 30g，蒸餾水lOOOmL，pH自然；培養(yǎng)溫度為25 30°C。
本發(fā)明所述步驟O)中的搖瓶培養(yǎng)基推薦的配方為土豆150 300g，葡萄糖 15 30g，蛋白胨 2 4g, KH2PO4I 3g, MgSO4 · 7Η20 0· 5 1. 5g, VB1O. 01 0. 03g，蒸溜水lOOOmL，pH自然。所述的斜面菌種的接種量為0. 5 1. Ocm2菌落面積的菌絲。本發(fā)明推薦的所述步驟O)的搖床培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為搖床轉(zhuǎn)速100 150r/ min，溫度25 ，裝液量與容器體積比為1 2 3，培養(yǎng)時間3 4d。本發(fā)明推薦的所述步驟(3)中的發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為葡萄糖20 30g，玉米粉 20 40g，花生粕 2 6g, KH2P042 4g, MgSO4 · 7H20 0· 5 1. 5g, VB1IO 20 X 10、， Na2Se034 6X 10_3g，蒸餾水lOOOmL，pH自然；所述的液體菌種接種量為3 5%。本發(fā)明中的斜面培養(yǎng)基、搖瓶培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基在配制好后進(jìn)行滅菌處理，然后再接種菌種，以保證得到的得到的富硒毛頭鬼傘菌絲體無其他雜菌污染。所述的滅菌處理采用現(xiàn)有的常規(guī)滅菌方式進(jìn)行即可。本發(fā)明推薦的所述步驟(3)的發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為生物反應(yīng)器溫度25 ^°C，無菌空氣的通氣量6 lOL/min，培養(yǎng)時間5 6d。在此條件下，不僅適合于毛頭鬼傘菌的生長，而且能讓毛頭鬼傘菌處于良性生長狀態(tài)中，可以充分地吸收元素硒，有利于菌體富集微量元素硒，并且也不會傷害毛頭鬼傘菌菌體，使生物量保持在較高的水平范圍。本發(fā)明所述步驟(3)中發(fā)酵的放罐質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為發(fā)酵液透明，氣味清香，按濕重計算菌絲體生物量為20 30g/L，富硒率為80 85%，pH為5 7，且無任何雜菌污染。本發(fā)明的第二個目的是通過以下技術(shù)措施來實(shí)現(xiàn)的一種上述富硒毛頭鬼傘菌菌粉的制備方法，其包括以下步驟(1)取毛頭鬼傘菌菌種于斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)得到毛頭鬼傘菌斜面菌種；(2)取步驟(1)中的毛頭鬼傘菌斜面菌種接種到搖瓶培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床培養(yǎng)得到液體菌種；(3)取步驟O)中所得的液體菌種轉(zhuǎn)接入含硒發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵至發(fā)酵液透明，氣味清香，按濕重計算菌絲體生物量為20 30g/L，pH為5 7時，停止發(fā)酵，得到富硒毛頭鬼傘菌絲體；(4)取步驟C3)所得的富硒毛頭鬼傘菌絲體進(jìn)行干燥，然后粉碎得到富硒毛頭鬼傘菌粉。本發(fā)明推薦的實(shí)施例是所述步驟(1)中的斜面培養(yǎng)基的配方為土豆150 300g，葡萄糖 15 30g，蛋白胨 1. 5 3g, KH2PO4I 3g,MgSO4 ·7Η20 0· 5 1. SgjVB1O. 01 0. 03g，瓊脂15 30g，蒸餾水lOOOmL，pH自然；培養(yǎng)溫度為25 30°C。本發(fā)明所述步驟O)中的搖瓶培養(yǎng)基推薦的配方為土豆150 300g，葡萄糖 15 30g，蛋白胨 2 4g, KH2PO4I 3g, MgSO4 · 7Η20 0· 5 1. 5g, VB1O. 01 0. 03g，蒸溜水lOOOmL，pH自然。所述的斜面菌種的接種量為0. 5 1. Ocm2菌落面積的菌絲。本發(fā)明推薦的所述步驟O)的搖床培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為搖床轉(zhuǎn)速100 150r/ min，溫度25 ，裝液量與容器體積比為1 2 3，培養(yǎng)時間3 4d。本發(fā)明推薦的所述步驟(3)中的發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為葡萄糖20 30g，玉米粉 20 40g，花生粕 2 6g, KH2P042 4g, MgSO4 · 7H20 0· 5 1. 5g, VB1IO 20 X 10、， Na2Se034 6X 10_3g，蒸餾水lOOOmL，pH自然；所述的液體菌種接種量為3 5%。本發(fā)明中的斜面培養(yǎng)基、搖瓶培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基在配制好后進(jìn)行滅菌處理，然后再接種菌種，以保證得到的得到的富硒毛頭鬼傘菌絲體無其他雜菌污染。所述的滅菌處理采用現(xiàn)有的常規(guī)滅菌方式進(jìn)行即可。本發(fā)明推薦的所述步驟(3)的發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為生物反應(yīng)器溫度25 ^°C，無菌空氣的通氣量6 10L/min，培養(yǎng)時間5 6d。本發(fā)明所述步驟(3)中發(fā)酵的放罐質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為發(fā)酵液透明，氣味清香，按濕重計算菌絲體生物量為20 30g/L，富硒率為80 85%，pH為5 7，且無任何雜菌污染。本發(fā)明所述的步驟中的富硒毛頭鬼傘菌絲體于50 60°C溫度下進(jìn)行干燥。 干燥時間控制在4 6小時之間，以保證富硒毛頭鬼傘菌中的活性成分的活性。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果(1)本發(fā)明采用毛頭鬼傘菌為載體，進(jìn)行硒的有機(jī)化轉(zhuǎn)變，使得二者的生物學(xué)功能得到互補(bǔ)。(2)本發(fā)明采用液態(tài)深層發(fā)酵法培養(yǎng)富硒毛頭鬼傘菌絲體，與固態(tài)發(fā)酵法相比，具有生產(chǎn)周期短，沒有雜菌感染，生物量和富硒率的相對穩(wěn)定，因而產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。本發(fā)明易于機(jī)械化生產(chǎn)，自動化管理控制。


圖1是本發(fā)明制備富硒毛頭鬼傘菌的工藝流程方框圖；圖2是本發(fā)明制備富硒毛頭鬼傘菌菌粉的工藝流程方框圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但不作為對本發(fā)明的限定。實(shí)施例一(1)按下述配方配制斜面培養(yǎng)基，滅菌后，接種經(jīng)活化的毛頭鬼傘菌種，在溫度下培養(yǎng)至斜面上長滿新鮮的毛頭鬼傘菌。斜面培養(yǎng)基的配方為土豆200g，葡萄糖15g，蛋白胨2g，KH2P042g, MgSO4 · 7H20 IgiVB1O. Olg，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。(2)按下述配方配制搖瓶培養(yǎng)基，滅菌后，挑取0. 5cm2菌落面積的毛頭鬼傘斜面菌種的菌絲，接種到三角瓶搖瓶培養(yǎng)基中，搖床轉(zhuǎn)速lOOr/min，溫度25°C，裝液量 75mL/250mL,培養(yǎng)3d，得液體菌種。搖瓶培養(yǎng)基的配方土豆200g，葡萄糖30g，蛋白胨4g，KH2P042g, MgSO4 · 7H201g， VB1O. Olg，蒸餾水1000mL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。(3)按下述配方，在生物反應(yīng)器中配制250L發(fā)酵培養(yǎng)基，然后進(jìn)行滅菌。滅菌完成后將所得的液體菌種按接種量3% (ymm/ymm+&mimm)接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中于溫度 25°C，無菌空氣通氣量為6L/min的條件下，培養(yǎng)時間5d，得富硒毛頭鬼傘菌絲體，按濕重計算菌絲體生物量為23. 5g/L，富硒率為80. 3%。其中，富硒率是指毛頭鬼傘菌絲體內(nèi)富集的硒含量與培養(yǎng)基中所添加的硒含量之比值。發(fā)酵培養(yǎng)基的配方葡萄糖20g，玉米粉40g，花生粕4g，KH2P042g, MgSO4 · 7H201g, VB1IOXKT3g, Na2Se034X l(T3g，蒸餾水 1000ml，pH 自然。(4)將所得毛頭鬼傘菌絲體于60°C鼓風(fēng)干燥設(shè)備中干燥4小時，然后取出用粉碎機(jī)粉碎后，得富硒毛頭鬼傘菌粉，密封保存。實(shí)施例二(1)按下述配方配制斜面培養(yǎng)基，然后滅菌后，接種經(jīng)活化的毛頭鬼傘菌種，在 25°C溫度下培養(yǎng)至斜面上長滿新鮮的毛頭鬼傘菌。斜面培養(yǎng)基的配方為土豆200g，葡萄糖15g，蛋白胨2g，KH2P042g, MgSO4 · 7H20 IgiVB1O. Olg，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。(2)按下述配方配制搖瓶培養(yǎng)基，滅菌后，挑取0. 75cm2菌落面積的斜面菌種的菌絲，接種到三角瓶搖瓶培養(yǎng)基中，搖床轉(zhuǎn)速150r/min，溫度^°C，裝液量100mL/250mL，培養(yǎng) 4d，得液體菌種。搖瓶培養(yǎng)基的配方土豆200g，葡萄糖30g，蛋白胨4g，KH2P042g, MgSO4 · 7H201g， VB1O. Olg，蒸餾水1000mL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。(3)按下述配方，在生物反應(yīng)器中配制250L發(fā)酵培養(yǎng)基，然后進(jìn)行滅菌。滅菌完成后將所得的液體菌種按接種量4% (ymm/ymm+&mimm)接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中于溫度 ^°C，無菌空氣通氣量8L/min的條件下，培養(yǎng)時間6d，得富硒毛頭鬼傘菌絲體，按濕重計算菌絲體生物量為26. 4g/L，富硒率為85.0%。發(fā)酵培養(yǎng)基的配方葡萄糖20g，玉米粉40g，花生粕4g，KH2P042g, MgSO4 · 7H201g, VB1IOXKT3g, Na2Se035X l(T3g，蒸餾水 lOOOmL，pH 自然。(4)將所得毛頭鬼傘菌絲體于50°C鼓風(fēng)干燥設(shè)備中干燥5小時，然后取出用粉碎機(jī)粉碎后，得富硒毛頭鬼傘菌粉，密封保存。實(shí)施例三(1)按下述配方配制斜面培養(yǎng)基，然后滅菌后，接種經(jīng)活化的毛頭鬼傘菌種，在 30°C溫度下培養(yǎng)至斜面上長滿新鮮的毛頭鬼傘菌。斜面培養(yǎng)基的配方為土豆200g，葡萄糖15g，蛋白胨2g，KH2P042g, MgSO4 · 7H20 IgiVB1O. 01g，瓊脂20g，蒸餾水lOOOmL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。(2)按下述配方配制搖瓶培養(yǎng)基，滅菌后，挑取Icm2菌落面積的菌絲，接種到三角瓶搖瓶培養(yǎng)基中，搖床轉(zhuǎn)速lOOr/min，溫度，裝液量90πι ν250ιΛ，培養(yǎng)4d，得液體菌種。搖瓶培養(yǎng)基的配方土豆200g，葡萄糖30g，蛋白胨4g，KH2P042g, MgSO4 · 7H201g， VB1O. 01g，蒸餾水lOOOmL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。C3)按下述配方，在生物反應(yīng)器中配制250L發(fā)酵培養(yǎng)基，然后進(jìn)行滅菌。滅菌完成后將所得的液體菌種按接種量5% (ymm/ymm+&mimm)接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中于溫度^°C，無菌空氣通氣量lOL/min的條件下，培養(yǎng)時間5d，得富硒毛頭鬼傘菌絲體，按濕重計算菌絲體生物量為24. 8g/L，富硒率為84. 7%。發(fā)酵培養(yǎng)基的配方葡萄糖20g，玉米粉40g，花生粕4g，KH2P042g, MgSO4 · 7H201g, VB1IOXKT3g, N￡ije034. 4X l(T3g/L，蒸餾水 lOOOmL，pH 自然。(4)將所得毛頭鬼傘菌絲體于55°C鼓風(fēng)干燥設(shè)備中干燥6小時，然后用粉碎機(jī)粉碎后，得富硒毛頭鬼傘菌粉，密封保存。上述實(shí)施并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，所有在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做修改和改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其特征在于，其包括以下步驟(1)取毛頭鬼傘菌菌種于斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)得到毛頭鬼傘菌斜面菌種；(2)取步驟(1)中的毛頭鬼傘菌斜面菌種接種到搖瓶培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床培養(yǎng)得到液體菌種；(3)取步驟O)中所得的液體菌種轉(zhuǎn)接入含硒發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵至發(fā)酵液透明， 氣味清香，按濕重計算菌絲體生物量為20 30g/L，pH為5 7時，停止發(fā)酵，得到富硒毛頭鬼傘菌絲體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其特征在于，所述步驟(1) 中的斜面培養(yǎng)基的配方為土豆150 300g，葡萄糖15 30g，蛋白胨1. 5 3g，KH2PO4I 3g，MgSO4 · 7Η20 0· 5 1. 5g，VB1O. 01 0. 03g,瓊脂 15 30g,蒸餾水 IOOOmL, pH 自然；培養(yǎng)溫度為25 30°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其特征在于，所述步驟(2) 中的搖瓶培養(yǎng)基的配方為土豆150 300g，葡萄糖15 30g，蛋白胨2 4g，KH2PO4I 3g，MgSO4 · 7Η20 0· 5 1. 5g，VB1O. 01 0. 03g，蒸餾水 IOOOmL, pH 自然；所述的斜面菌種的接種量為0. 5 1. Ocm2菌落面積的菌絲。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其特征在于，所述步驟(2) 的搖床培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為搖床轉(zhuǎn)速100 150r/min，溫度25 ^°C，裝液量與容器體積比為1 2 3，培養(yǎng)時間3 4d。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其特征在于，所述步驟(3) 中的發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為葡萄糖20 30g，玉米粉20 40g，花生粕2 6g，KH2P042 4g, MgSO4 · 7H20 0· 5 1. 5g, VB1IO 20X l(T3g，Na2Se034 6X l(T3g，蒸溜水 IOOOmL, pH 自然；所述的液體菌種接種量為3 5%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其特征在于，所述步驟(3) 的發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為生物反應(yīng)器溫度25 ，無菌空氣的通氣量6 lOL/min，培養(yǎng)時間5 6d。
7.—種權(quán)利要求1 6任一權(quán)利要求所述的富硒毛頭鬼傘菌菌粉的制備方法，其特征在于，其包括以下步驟(1)取毛頭鬼傘菌菌種于斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)得到毛頭鬼傘菌斜面菌種；(2)取步驟(1)中的毛頭鬼傘菌斜面菌種接種到搖瓶培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床培養(yǎng)得到液體菌種；(3)取步驟O)中所得的液體菌種轉(zhuǎn)接入含硒發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵至發(fā)酵液透明， 氣味清香，按濕重計算菌絲體生物量為20 30g/L，pH為5 7時，停止發(fā)酵，得到富硒毛頭鬼傘菌絲體；(4)取步驟C3)所得的富硒毛頭鬼傘菌絲體進(jìn)行干燥，然后粉碎得到富硒毛頭鬼傘菌粉。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的富硒毛頭鬼傘菌菌粉的制備方法，其特征在于，所述的步驟 (4)中的富硒毛頭鬼傘菌絲體于50 60°C溫度下進(jìn)行干燥。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的富硒毛頭鬼傘菌菌粉的制備方法，其特征在于，所述的干燥時間控制在4 6小時之間。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種富硒毛頭鬼傘菌絲體的制備方法，其特征在于，其包括以下步驟(1)取毛頭鬼傘菌菌種于斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)得到毛頭鬼傘菌斜面菌種；(2)取步驟(1)中的毛頭鬼傘菌斜面菌種接種到搖瓶培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床培養(yǎng)得到液體菌種；(3)取步驟(2)中所得的液體菌種轉(zhuǎn)接入含硒發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵至發(fā)酵液透明，氣味清香，菌絲體生物量為20～30g/L，pH為5～7時，停止發(fā)酵，得到富硒毛頭鬼傘菌絲體。本發(fā)明還公開了一種富硒毛頭鬼傘菌菌粉的制備方法。本發(fā)明采用毛頭鬼傘菌為載體，進(jìn)行硒的有機(jī)化轉(zhuǎn)變，使得二者的生物學(xué)功能得到互補(bǔ)。
文檔編號A01G1/04GK102283021SQ20111019408
公開日2011年12月21日 申請日期2011年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月26日
發(fā)明者余杰, 崔鵬舉, 楊明泉, 覃煥達(dá), 賈愛娟 申請人:廣東美味鮮調(diào)味食品有限公司