專利名稱：一種家兔右側(cè)迷走神經(jīng)-右心房離體實驗?zāi)Ｐ偷慕⒎椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)的應(yīng)用領(lǐng)域，主要用于研究迷走神經(jīng)副交感神經(jīng)系統(tǒng) 對心率、心房肌收縮和激素如心房鈉尿肽等分泌的調(diào)控機制，具體地說是一種家兔右側(cè)迷 走神經(jīng)-右心房離體實驗?zāi)Ｐ偷慕⒎椒ā?br> 背景技術(shù)：
迷走神經(jīng)對心臟功能具有調(diào)控作用是本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員所熟知的。目前，在體 中頸部迷走神經(jīng)的分離在生理學(xué)中作為被廣泛應(yīng)用的一個技術(shù)，已非常成熟，但是用于觀 察和研究其具體調(diào)控作用的實驗都是在活體上進行的。比如在文獻Zhang Y, Ilsar I， Sabbah ΗΝ, et al. Relationship between right cervical vagus nerve stimulation and atrial fibrillation inducibility therapeutic intensities do not increase arrhythmogenesis. Heart Rhythm. 2009，6 (2) 244-50 中，研究人員通過在體剌激頸部 右側(cè)迷走神經(jīng)實驗，觀察到適度的迷走神經(jīng)剌激不會促進心律失常的產(chǎn)生；在文獻Ohad DG, Sinai Y，Zaretsky A，et al. Ventricular rate control using a novelvagus nerve stimulating system in a dog with chronic atrial fibrillation. J Vet Cardiol. 2008，10(2) 147-54中，研究人員通過在體實驗發(fā)現(xiàn)在慢性房顫中迷走神經(jīng)剌激 可明顯降低心率；在文獻 Evlakhov VI，Poiasov IZ，Tkachenko Bi. The role of vagus nerves in different changes ofthe right atrial pressure following intravenous injection ofpressor vasoactive drugs. Ross Fiziol ZhIm I M Sechenova. 2005,91 (5) 502-13中，研究人員通過在體實驗研究靜脈注射去甲腎上腺素和血管緊張素后右心房壓 力變化中迷走神經(jīng)的作用；在文獻Huang CX，Zhao QY, Jiang H，et al. Experimental study of the effect of the vagus nerve on atrial electrical remodeling. JElectrocardiol. 2003,36(4) 295-300中，研究人員通過在體實驗研究迷走神經(jīng)對心房 電重構(gòu)的影響。基于上述實驗均是在活體上進行的，其研究結(jié)果受到多種生理因素的影響，最終 效應(yīng)不只是單純的迷走神經(jīng)效應(yīng)，而是多種生理因素參與下的綜合效應(yīng)，不易分析其機制。 因此，在活體實驗的基礎(chǔ)上，將分離出的迷走神經(jīng)與心房連接體置于模擬的生理條件中，使 其保持正常的生理狀態(tài)，有助于研究迷走神經(jīng)對心臟功能調(diào)控機制研究。

發(fā)明內(nèi)容
為解決上述存在的技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種家兔右側(cè)迷走神經(jīng)-右心房離體 實驗?zāi)Ｐ偷慕⒎椒?，對從活體分離出的右側(cè)迷走神經(jīng)-右心房標本采取有效的保護措 施，建立穩(wěn)定而可行的離體實驗?zāi)Ｐ停瑢ζ溥M行各種實驗，進而能獲取可靠的心臟功能指標 相關(guān)實驗數(shù)據(jù)。由于右側(cè)迷走神經(jīng)分支分布于右心房，可調(diào)控心房的收縮功能、心率和內(nèi)分 泌功能，因此此模型將為副交感神經(jīng)系統(tǒng)與心臟功能相關(guān)的研究領(lǐng)域提供新的有力的研究 手段。
為達到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下一種家兔右側(cè)迷走神經(jīng)-右心房離體實驗?zāi)Ｐ偷慕⒎椒?，其特征在于，通過以 下步驟實現(xiàn)1)麻醉家兔；2)取家兔仰臥位暴露其頸部，先分離出氣管，再分離氣管旁的肌肉，暴露出頸動脈 血管鞘；3)從右側(cè)頸動脈血管鞘分離出右側(cè)迷走神經(jīng)，在其下穿一根線，結(jié)扎并在近中樞 端剪斷；4)剪開腹腔，剪斷腹主動脈放血，沿右側(cè)向上剪開肋骨，暴露心臟；5)在心包膜完整的情況下分離出胸腔內(nèi)心臟和周圍組織，直至頸部的氣管、食管、 迷走神經(jīng)等，取出右側(cè)迷走神經(jīng)_心臟組織連接體；6)將分離得到的右側(cè)迷走神經(jīng)_心臟組織連接體迅速放入預(yù)先裝有冷的氧飽和 K-H液平皿中，然后把左右心室橫切斷放血，快速把K-H液注入心房中，剪去上腔靜脈根部 的脂肪墊以外的多余組織(如肺、氣管、左右心室、左心房和脂肪組織等)，從而得到右側(cè)迷 走神經(jīng)-右心房連接體，在右心房底部的切口處向上插入塑料導(dǎo)管；7)麥氏浴器內(nèi)預(yù)先放入K-H液，在麥氏浴器的底部設(shè)置有塑料環(huán)，塑料環(huán)上設(shè)置 有等間隔的小細孔，緩沖瓶內(nèi)預(yù)先放入K-H液，混合氣體瓶分別與塑料環(huán)、緩沖瓶連接，緩 沖瓶與麥氏浴器連接，打開混合氣閥，混合氣進入K-H液緩沖瓶和塑料環(huán)中，并通過塑料環(huán) 上的小細孔釋放混合氣使麥氏浴器內(nèi)K-H液處于氧飽和狀態(tài)；8)用循環(huán)水浴預(yù)熱緩沖瓶和麥氏浴器內(nèi)的K-H液至36°C ；9)將右側(cè)迷走神經(jīng)_右心房連接體置于麥氏浴器的K-H液中，在右心房上緣和下 緣分別設(shè)置有上線和下線，下線固定于麥氏浴器中，通過上線將右心房懸掛并使其穩(wěn)定，拉 緊下線，將上線與張力換能器連接，所述張力換能器與生物信號記錄儀電腦連接，用以實現(xiàn) 對實驗數(shù)據(jù)的記錄和分析。所述的小細孔由注射針頭在塑料環(huán)上穿過而制成。本發(fā)明所闡述的家兔右側(cè)迷走神經(jīng)_右心房離體實驗?zāi)Ｐ偷慕⒎椒?，是從活體 家兔上分離得到右迷走神經(jīng)-右心房連接體標本，再將其放入模擬的生理條件中，通過有 效的保護方法提高了氧氣的有效利用，從而使右迷走神經(jīng)-右心房連接體標本保持正常的 生理狀況。利用右側(cè)迷走神經(jīng)_右心房標本在模擬的生理條件中進行實驗，能獲得單一而 恒定的迷走神經(jīng)效應(yīng)，可排除在體時的多種因素的干擾，有助于研究副交感神經(jīng)系統(tǒng)對心 臟功能的調(diào)控機制，進而為防治心臟疾病作出貢獻。


圖1為家兔右側(cè)迷走神經(jīng)_右心房標本在體內(nèi)中的位置示意圖；圖2為本發(fā)明實驗?zāi)Ｐ褪疽鈭D。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明進行詳細描述術(shù)前準備配K-H 液，其組成為(mmol/L) NaCl 119, KCl 4. 7，MgSO4L 2，KH2PO4L 2，NaHC0325, Gluose 5.5.；麥氏浴器7底部與廢液缸13連接，麥氏浴器7內(nèi)放下線16，要足 夠長；麥氏浴器7和緩沖瓶18內(nèi)加K-H液后通氧，要彌散且足夠大；備好器械(粗剪刀，組 織剪，玻璃分針，棉球，醫(yī)用4號線，戊巴比妥鈉，20ml注射器，培養(yǎng)皿2個，小彎鑷)，生 理鹽水，紗布等。如圖1和圖2所示為本發(fā)明的一個具體實施例，具體步驟如下1)按1 %戊巴比妥鈉4ml/kg劑量麻醉兔子；2)將其仰臥位固定四肢和頭部于手術(shù)臺上，充分暴露頸部。用剪刀緊貼頸部皮膚 將毛剪去，沿頸部正中從下頌下2cm到胸廓上口剪開皮膚，分離皮下筋膜，鈍性分離周圍肌 肉，暴露氣管6，用止血鉗將肌肉和皮膚向外側(cè)牽拉，分離氣管6旁的肌肉，即可暴露深部組 織內(nèi)的頸動脈血管鞘；3)用濕棉球和玻璃分針小心分離右側(cè)頸動脈1血管鞘，可見右側(cè)頸動脈1旁有三 條神經(jīng)，其中最粗的即為右側(cè)迷走神經(jīng)2，其他兩條分別是右側(cè)交感神經(jīng)3和右側(cè)減壓神經(jīng) 4，用眼科剪將右側(cè)迷走神經(jīng)2與周圍組織分離，直至胸廓上口，在其下穿一根線，結(jié)扎并在 近中樞端剪斷右側(cè)迷走神經(jīng)2 (期間要不斷灑生理鹽水，保持濕潤狀態(tài))；4)剪開腹腔，剪斷腹主動脈放血，沿右側(cè)向上剪開肋骨，暴露心臟；5)換用組織剪向上挑著小心剪斷胸廓上口的肌肉，勿傷到神經(jīng)，在心包膜完整的 情況下從下往上貼著脊柱和胸壁分離出胸腔內(nèi)所有組織，包括心臟和周圍組織，直至頸部 的氣管6、食管、迷走神經(jīng)等，取出右側(cè)迷走神經(jīng)-心臟組織連接體；6)將分離得到的右側(cè)迷走神經(jīng)_心臟組織連接體迅速放入預(yù)先裝有冷的氧飽和 K-H液平皿中，然后把左右心室橫切斷放血，快速把K-H液注入心房中，換液，剪去多余組 織，如肺、氣管、左右心室、左心房和脂肪組織，但上腔靜脈根部的脂肪墊要保留，從而得到 右側(cè)迷走神經(jīng)_右心房連接體，在右心房5內(nèi)放入長度為0. 7cm、內(nèi)徑為0. 3cm的兩端開口 的塑料導(dǎo)管8 ；7)在麥氏浴器7的底部設(shè)置有塑料環(huán)9，塑料環(huán)9上采用四號注射針頭穿過而制 成等間隔的多個小細孔14，所述小細孔14 一般為6-12個，本實施例中設(shè)置為8個，混合氣 體瓶17分別與塑料環(huán)9、緩沖瓶18連接，緩沖瓶18與麥氏浴器7連接，所述混合氣體瓶17 內(nèi)為95%的O2和5%的CO2,打開混合氣閥19，混合氣就進入裝有K-H液的緩沖瓶18和塑 料環(huán)9中，而且通過塑料環(huán)9上的小細孔14釋放混合氣致使麥氏浴器7內(nèi)K-H液處于氧飽 和狀態(tài)；8)用循環(huán)水浴預(yù)熱緩沖瓶18和麥氏浴器7內(nèi)的K-H液至36°C ；9)將右側(cè)迷走神經(jīng)_右心房連接體置于麥氏浴器7的K-H液中，在右心房5上緣 和下緣分別設(shè)置有上線15和下線16，下線16固定于麥氏浴器7中，通過上線15將右心房 5懸掛并穩(wěn)定lOmin，拉緊下線16，將上線15與張力換能器10連接，所述張力換能器10與 生物信號記錄儀電腦12連接，用以實現(xiàn)對實驗數(shù)據(jù)的記錄和分析。麥氏浴器7要每隔10 15min換K-H液一次，換液2 3次心率穩(wěn)定(士5次/ min)后開始實驗。研究藥物作用時，直接用注射器注射到麥氏浴器7中K-H液中；進行迷走 神經(jīng)刺激時，輕輕將其提出液面，通過刺激器11按照一定的刺激參數(shù)進行實驗(頻率5 15Hz,電壓7-10V，脈沖持續(xù)時間0. 2ms，每分鐘刺激20s，連續(xù)三次心率的反應(yīng)一致方可開 始實驗)。刺激器11與生物信號記錄儀電腦12連接，將結(jié)果直接顯示于其上。
本發(fā)明在實施過程中需要注意的有以下三點，一是右側(cè)迷走神經(jīng)_右心房連接體 標本取出后一直是置于K-H液中的，并不間斷供氧，防止缺氧；二是在操作過程中，注意保 護右側(cè)迷走神經(jīng)2，防止損傷；三是在麥氏浴器7中，氧氣量要充足，小泡、彌散，缺氧會致刺 激右側(cè)迷走神經(jīng)2不敏感；總之就是要在離體情況下保持右側(cè)迷走神經(jīng)2的正常生理功能。通過長時間的實驗證明，迷走神經(jīng)對氧氣特敏感，一旦氧的攝取不足，易出現(xiàn)其功 能失去。因此，在保持迷走神經(jīng)的正常生理功能中最關(guān)鍵的要素就是如何提高氧氣的有效 利用。如果達不到此效果供氧也是不能很好地利用，保持不了右側(cè)迷走神經(jīng)2的正常生理 功能狀態(tài)，實驗難以進行。因此，本實施例中在麥氏浴器7的底部設(shè)置了環(huán)狀結(jié)構(gòu)的塑料環(huán) 9，在塑料環(huán)9上用4號注射針頭穿過以制成等間隔的8個小細孔，使氧氣以霧狀式彌漫擴 散，提高了氧氣在右心房5外部K-H液中的飽和度；另外，在右心房5的底部切口處放入長 度為0. 7cm、內(nèi)徑為0. 3cm的兩端開口的塑料導(dǎo)管8，提高了右心房5內(nèi)部的K-H液中的氧 氣飽和度，使支配右心房5的右側(cè)迷走神經(jīng)2的小分支得到充分的供氧，通過以上兩種措施 使右側(cè)迷走神經(jīng)2的主干和分支均保持著正常的生理功能狀態(tài)，從而使得實驗順利進行。
權(quán)利要求
1. 一種家兔右側(cè)迷走神經(jīng)-右心房離體實驗?zāi)Ｐ偷慕⒎椒?，其特征在于，通過以下 步驟實現(xiàn)1)麻醉家兔；2)取家兔仰臥位暴露其頸部，先分離出氣管(6)，再分離氣管旁的肌肉，暴露出頸動脈 血管鞘；3)從右側(cè)頸動脈(1)血管鞘分離出右側(cè)迷走神經(jīng)(2)，在其下穿一根線，結(jié)扎并在近中 樞端剪斷；4)剪開腹腔，剪斷腹主動脈放血，沿右側(cè)向上剪開肋骨，暴露心臟；5)在心包膜完整的情況下分離出胸腔內(nèi)心臟和周圍組織，直至頸部的氣管(6)、食管、 迷走神經(jīng)等，取出右側(cè)迷走神經(jīng)_心臟組織連接體；6)將分離得到的右側(cè)迷走神經(jīng)_心臟組織連接體迅速放入預(yù)先裝有冷的氧飽和K-H液 平皿中，剪開心包膜后把左右心室橫切斷放血，快速把K-H液注入心房中，剪去上腔靜脈根 部的脂肪墊以外的多余組織(如肺、氣管、左右心室、左心房和脂肪組織等)，從而得到右側(cè) 迷走神經(jīng)-右心房連接體，在右心房(5)底部的切口處向上插入塑料導(dǎo)管(8)；7)麥氏浴器(7)內(nèi)預(yù)先放入K-H液，在麥氏浴器(7)的底部設(shè)置有塑料環(huán)(9)，塑料環(huán) (9)上設(shè)置有等間隔的小細孔(14)，緩沖瓶(18)內(nèi)預(yù)先放入K-H液，混合氣體瓶(17)分別 與塑料環(huán)(9)、緩沖瓶(18)連接，緩沖瓶(18)與麥氏浴器(7)連接，打開混合氣閥(19)，混 合氣進入緩沖瓶(18)和塑料環(huán)(9)中，并通過塑料環(huán)(9)上的小細孔(14)釋放混合氣使 麥氏浴器(7)內(nèi)K-H液處于氧飽和狀態(tài)；8)用循環(huán)水浴預(yù)熱緩沖瓶(18)和麥氏浴器(7)內(nèi)的K-H液至36°C；9)將右側(cè)迷走神經(jīng)-右心房連接體置于麥氏浴器(7)的K-H液中，在右心房(5)上緣 和下緣分別設(shè)置有上線(15)和下線(16)，下線(16)固定于麥氏浴器(7)中，通過上線(15) 將右心房(5)懸掛并使其穩(wěn)定，拉緊下線(16)，將上線(15)與張力換能器(10)連接，所述 張力換能器(10)與生物信號記錄儀電腦(12)連接，用以實現(xiàn)對實驗數(shù)據(jù)的記錄和分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種家兔右側(cè)迷走神經(jīng)_右心房離體實驗?zāi)Ｐ偷慕⒎椒ǎ?其特征在于，所述的小細孔(14)由注射針頭在塑料環(huán)(9)上穿過而制成。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種家兔右側(cè)迷走神經(jīng)-右心房離體實驗?zāi)Ｐ偷慕⒎椒?，涉及醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)的應(yīng)用領(lǐng)域，從活體家兔上分離得到右迷走神經(jīng)-右心房連接體標本，再將其放入模擬體液的生理條件中，通過有效的保護方法提高了氧氣的有效利用，從而使右側(cè)迷走神經(jīng)-右心房連接體標本保持正常的生理狀態(tài)，模型建立后再對其進行研究，將探討迷走神經(jīng)對心率、心房肌收縮和激素如心房鈉尿肽等分泌的調(diào)節(jié)機制。利用右側(cè)迷走神經(jīng)-右心房標本在離體中進行實驗，能獲得單一而恒定的迷走神經(jīng)效應(yīng)，可排除在體時的多種因素的干擾，有助于研究副交感神經(jīng)系統(tǒng)對心臟功能的調(diào)控機制，進而為防治心臟疾病作出貢獻。
文檔編號A61D1/00GK101999945SQ20101050441
公開日2011年4月6日 申請日期2010年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月29日
發(fā)明者周廣海, 張鳳, 文今福, 王欣農(nóng), 金景玉, 金松軍, 金松南 申請人:泰山醫(yī)學(xué)院