專利名稱：一種復(fù)合微生物添加劑及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復(fù)合微生物添加劑808及其制備方法與應(yīng)用，屬于植物生物調(diào)節(jié) 劑在農(nóng)作物種植中應(yīng)用的生物材料技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
飼料添加劑最初的定義是飼料補(bǔ)充物，以添加維生素和無機(jī)鹽等成分填補(bǔ)飼料中 營養(yǎng)成分的不足，平衡飼料的營養(yǎng)，并獲得良好的飼養(yǎng)效果。隨著畜禽集約化死樣的進(jìn)一步發(fā)展和畜禽飼養(yǎng)密度的增加，各種畜禽疾病的發(fā)生 越來越頻繁，多數(shù)養(yǎng)殖的畜禽都處于亞健康狀態(tài)。曾經(jīng)廣泛使用的治療藥物不僅使病原微 生物產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗藥性，還引起畜產(chǎn)品藥物殘留的嚴(yán)重問題，發(fā)展下去勢必影響人類的 健康。微生態(tài)制劑在這種歷史背景下應(yīng)運(yùn)而生，為畜牧業(yè)的持續(xù)發(fā)展提供了一條有效、 可靠的途徑。采用生物工程技術(shù)復(fù)合發(fā)酵，利用多種微生物相互作用，形成一個(gè)生態(tài)平衡的 系統(tǒng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的問題是采用多種菌種制備復(fù)合微生物菌劑，利用該復(fù)合微生物 菌劑制成飼料級(jí)復(fù)合微生物添加劑應(yīng)用在畜禽養(yǎng)殖業(yè)。進(jìn)入畜禽動(dòng)物體內(nèi)，形成優(yōu)勢種群， 參與腸道微生物的平衡，提高動(dòng)物的飼料利用率和生長速度，提高動(dòng)物機(jī)體非特異性免疫 功能，防病抗病。本發(fā)明的技術(shù)解決方案如下一種復(fù)合微生物添加劑808采用啤酒酵母 {Saccharomyces cerevisiae) ATCC No. 9763，產(chǎn)朊假絲酵母utilis) ATCC No. 22023，沼澤紅假單胞菌 iHhodopseudom onas /^^Asiris) ATCCNo. 33872，植物乳桿菌 {Lactobacillus plantarum)ATCC No. 8014, BfSIILff^ {Leatobacillus acidophilus) ATCC No. 11073，枯草芽孢桿菌(feci/^As subtil is) KKL No. 6633制備菌種；所述菌種的 質(zhì)量百分比如下啤酒酵母30飛0%，產(chǎn)朊假絲酵母5 30%，沼澤紅假單胞菌5 30%，植物乳桿 菌5 30%，嗜酸乳桿菌5 40%，枯草芽孢桿菌5 25%。所述的一種復(fù)合微生物添加劑808的制備步驟如下
1.接種將所述各菌種接于斜面培養(yǎng)基上。啤酒酵母培養(yǎng)溫度為30°C，培養(yǎng)時(shí)間為6 48h ；產(chǎn)朊假絲酵母培養(yǎng)溫度25 30°C，培養(yǎng)時(shí)間為6 48h ；沼澤紅假單胞菌培養(yǎng)溫度為 25 30°C，培養(yǎng)時(shí)間為6 48h ；植物乳桿菌培養(yǎng)溫度25 30°C，培養(yǎng)時(shí)間為6 48h ；嗜酸 乳桿菌培養(yǎng)溫度為27 37°C，培養(yǎng)時(shí)間為6 48h ；枯草芽孢桿菌培養(yǎng)溫度為27 37°C， 培養(yǎng)時(shí)間為6 48h ；
2.一級(jí)菌種培養(yǎng)將所述菌種分別接種于盛有液體培養(yǎng)基的50mL錐形瓶中，培養(yǎng)基pH 為6. 0 8. 0，錐形瓶放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩24 48h ；采用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，菌 液中菌種數(shù)量分別達(dá)到IO8個(gè)/mL ；3.二級(jí)發(fā)酵將所述菌種分別接種于盛有液體培養(yǎng)基的IOOOmL錐形瓶中，培養(yǎng)基 pH3飛，放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩48 72h ；使菌種數(shù)量分別達(dá)到IO8個(gè)/mL以上， 將各菌種按所述菌種的質(zhì)量百分比混合；
4.三級(jí)發(fā)酵將混合后的菌液接種于盛有復(fù)合菌劑培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，復(fù)合菌劑培養(yǎng) 基pH3飛，接種量為1 5%，30°C下培養(yǎng)4 7天，使發(fā)酵液中菌數(shù)達(dá)到8 10 X IO8個(gè)/mL， 即得到所述微生物復(fù)合菌劑。所述液體培養(yǎng)基配方為
1.啤酒酵母采用的液體培養(yǎng)基配方為酪蛋白胨15g/L，酵母25g/L，葡萄糖30g/L， KH2PO4 2. 4g/L, K2HPO4 · 3H20 16. 34 g/L ；
2.產(chǎn)阮假絲酵母采用的液體培養(yǎng)基配方為稀釋去除啤酒花的麥芽汁至濃度為 12Brix,瓊脂15 g，高壓滅菌30分鐘；
3.沼澤紅假單胞菌采用的液體培養(yǎng)基配方為氯化銨1.5g，磷酸二氫鉀1. 5g，七水硫 酸鎂0. 8g，氯化鈉4. Og,碳酸氫鈉1. 8g，氯化鈣0. Olg, VBO. Ig,酵母粉1. 0 g，乙酸鈉4. Og, 微量元素1. OmL/L包括(六水氯化鐵5. Og,七水硫酸鋅1. Og,五水硫酸銅0. 05g,六水氯化
鈷0. 5g，硼酸1. Og,四水氯化錳0. 5g)，添加乙酸調(diào)節(jié)pH，水適量； 4.植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌采用的液體培養(yǎng)基配方為乳酪蛋白胨10g、蛋白胨10g、 酵母膏5g、葡萄糖5g、吐溫80 lg、K2HP042g、醋酸鈉5g、檸檬酸二胺2g、MgS04 · 7H20 0. 2g、MnSO4 · H2O 0. 05g、蒸餾水 1000ml ；
5.枯草芽孢桿菌采用的液體培養(yǎng)基配方為牛肉膏5g、蛋白胨10g、Nacl3g、pH 7.0。所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基配方為蜂蜜1 5g/100mL、蔗糖2 10g/100mL、蛋白胨 0. 1 0. 5g/100mL,KH2PO4 0. 1 0. 5g/100mL,K2HPO4 0. 5 2g/100mL、MgS04 ·7Η20 0· 5 2g/100mL、Nacl 0. 5 2g/100mL 其余為蒸餾水。所述復(fù)合微生物添加劑808在畜禽動(dòng)物養(yǎng)殖中作為飼料添加劑。本發(fā)明的有益效果是復(fù)合微生物菌劑采用啤酒酵母、產(chǎn)朊假絲酵母、沼澤紅假 單胞菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌制備菌種。以上菌種分別經(jīng)過一級(jí)菌種培 養(yǎng)，二、三級(jí)發(fā)酵，使發(fā)酵液中菌數(shù)達(dá)到8 10 X IO8個(gè)/mL，即得復(fù)合微生物添加劑808。本 產(chǎn)品經(jīng)長期實(shí)地驗(yàn)證，配方合理，功效穩(wěn)定，能夠促進(jìn)動(dòng)物生長，提高動(dòng)物產(chǎn)品產(chǎn)量，提高成 活率，防病抗病，提高飼料轉(zhuǎn)化率，改善產(chǎn)品品質(zhì)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明采用啤酒酵母、Saccharomycescerevisiae) ATCC No. 9763，產(chǎn)朊假絲酵 母(Candida utilis) ATCC No. 22023，沼澤紅假單胞菌onas Palustris) ATCCNo. 33872，植物乳桿菌 Lactobacillus plantarum)ATCC No. 8014，嗜酸乳桿菌 {Leatobacillus acidophilus) ATCC No. 11073，枯草芽孢桿菌 Uaci/A/s subtil is) KKL No. 6633制備菌種，生產(chǎn)復(fù)合微生物添加劑808。菌種的質(zhì)量百分比為啤酒酵母30飛0%，產(chǎn)朊假絲酵母5 30%，沼澤紅假單胞菌 5 30%，植物乳桿菌5 30%，嗜酸乳桿菌5 40%，枯草芽孢桿菌5 25%。
常用配方表
5
按照上述配方表和制備方法得到的復(fù)合微生物添加劑808，菌數(shù)含量達(dá)到9 X IO8個(gè)/
mLo實(shí)施例1
采用本發(fā)明制備的復(fù)合微生物添加劑808 (以下簡稱808)在仔豬養(yǎng)殖中應(yīng)用效果試
驗(yàn)
1.供試材料復(fù)合微生物添加劑808
2.試驗(yàn)對(duì)象保山農(nóng)校豬場選擇45日齡的斷奶長約2元雜仔豬16頭。3.試驗(yàn)分組按照強(qiáng)弱大小搭配均勻分組，每組8頭，試驗(yàn)組頭均體重12. 79kg，對(duì) 照組頭均體重13. 31kg。試驗(yàn)要求試驗(yàn)組和對(duì)照組的基礎(chǔ)飼料配制相同。試驗(yàn)組飼糧添加復(fù)合微生物添 加劑808發(fā)酵4-6天才進(jìn)行飼喂。4.試驗(yàn)方法
試驗(yàn)組每0. 1噸飼料使用復(fù)合微生物添加劑808 IOOmLJn 30kg清水。對(duì)照組基礎(chǔ)飼料添加“豬博士”預(yù)混料，進(jìn)行飼喂。先進(jìn)行5天的飼喂，然后進(jìn)入正式試驗(yàn)期32天。表1基礎(chǔ)飼料組成及營養(yǎng)成分
試驗(yàn)組飼喂發(fā)酵飼料，對(duì)照組飼喂?jié)癜枇希刻祜曃?頓，兩組均采用限制飼喂方式 (八成飽)，自由飲水。5.試驗(yàn)結(jié)果與分析
試驗(yàn)組日增重348g，對(duì)照組日增重333g。試驗(yàn)組的仔豬采食量少，嗜睡，糞便量少且 臭味小；對(duì)照組仔豬喜好運(yùn)動(dòng)，少數(shù)出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)疾病。由此可見，使用復(fù)合微生物添加劑 808發(fā)酵飼料飼喂仔豬，提高飼料的利用率，相對(duì)降低生產(chǎn)成本，有效預(yù)防了仔豬的胃腸及 呼吸系統(tǒng)疾病。實(shí)施例2
采用本發(fā)明制備的復(fù)合微生物添加劑808 (以下簡稱808)在奶牛養(yǎng)殖中應(yīng)用效果試
驗(yàn)1.試驗(yàn)材料
供試奶牛健康無疾病的泌乳荷斯坦奶牛
2.試驗(yàn)方法
試驗(yàn)設(shè)兩個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)，每個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)10頭奶牛分為兩組，試驗(yàn)組飼喂復(fù)合微生物添加劑 808，另一組對(duì)照。第一個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)，每日一次飼料添加。第二個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)，每日分早、午、晚三次飼料添加。3.試驗(yàn)時(shí)間為30天。5天預(yù)試期，正式試驗(yàn)期為25天。4.試驗(yàn)結(jié)果
試驗(yàn)前10天試驗(yàn)組比對(duì)照組產(chǎn)奶量提高8%。后15天平均比對(duì)照組提高13. 4%。奶牛 增奶效果顯著。日糧利用率提高，生產(chǎn)成本降低。
權(quán)利要求
一種復(fù)合微生物添加劑，其特征在于采用 啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) ATCC No.9763，產(chǎn)朊假絲酵母(Candida utilis)ATCC No.22023，沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudom onas Palustris)ATCCNo.33872，植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)ATCC No.8014，嗜酸乳桿菌(Leatobacillus acidophilus) ATCC No.11073，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)ATCC No.6633制備菌種；所述菌種的質(zhì)量百分比如下啤酒酵母30~60%，產(chǎn)朊假絲酵母5~30%，沼澤紅假單胞菌5~30%，植物乳桿菌5~30%，嗜酸乳桿菌5~40%，枯草芽孢桿菌5~25%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合微生物添加劑的制備方法，其特征在于所述復(fù)合 微生物添加劑的制備步驟如下、1.接種將所述各菌種接于斜面培養(yǎng)基上。啤酒酵母培養(yǎng)溫度為30°C，培養(yǎng)時(shí)間為6 48h ；產(chǎn)朊假絲酵母培養(yǎng)溫度25 30°C，培養(yǎng)時(shí)間為6 48h ；沼澤紅假單胞菌培養(yǎng)溫度為 25 30°C，培養(yǎng)時(shí)間為6 48h ；植物乳桿菌培養(yǎng)溫度25 30°C，培養(yǎng)時(shí)間為6 48h ；嗜酸 乳桿菌培養(yǎng)溫度為27 37°C，培養(yǎng)時(shí)間為6 48h ；枯草芽孢桿菌培養(yǎng)溫度為27 37°C， 培養(yǎng)時(shí)間為6 48h ；、2.一級(jí)菌種培養(yǎng)將所述菌種分別接種于盛有液體培養(yǎng)基的50mL錐形瓶中，培養(yǎng)基pH 為6. 0 8. 0，錐形瓶放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩24 48h ；采用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，菌 液中菌種數(shù)量分別達(dá)到IO8個(gè)/mL ；
3.二級(jí)發(fā)酵將所述菌種分別接種于盛有液體培養(yǎng)基的IOOOmL錐形瓶中，培養(yǎng)基 pH3飛，放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩48 72h ；使菌種數(shù)量分別達(dá)到IO8個(gè)/mL以上， 將各菌種按所述菌種的質(zhì)量百分比混合；
4.三級(jí)發(fā)酵將混合后的菌液接種于盛有復(fù)合菌劑培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，復(fù)合菌劑培養(yǎng) 基pH3飛，接種量為1 5%，30°C下培養(yǎng)4 7天，使發(fā)酵液中菌數(shù)達(dá)到8 10 X IO8個(gè)/mL， 即得到所述微生物復(fù)合菌劑。、3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種復(fù)合微生物添加劑的制備方法，其特征在于所述液體 培養(yǎng)基配方為1.啤酒酵母采用的液體培養(yǎng)基配方為酪蛋白胨15g/L，酵母25g/L，葡萄糖30g/L， KH2PO4 2. 4g/L, K2HPO4 · 3H20 16. 34 g/L ；2.產(chǎn)阮假絲酵母采用的液體培養(yǎng)基配方為稀釋去除啤酒花的麥芽汁至濃度為 12Brix,瓊脂15 g，高壓滅菌30分鐘；3.沼澤紅假單胞菌采用的液體培養(yǎng)基配方為氯化銨1.5g，磷酸二氫鉀1. 5g，七水硫 酸鎂0. 8g，氯化鈉4. Og,碳酸氫鈉1. 8g，氯化鈣0. 01g, VB0. Ig,酵母粉1. 0 g，乙酸鈉4. Og, 微量元素1. 0mL/L包括(六水氯化鐵5. Og,七水硫酸鋅1. Og,五水硫酸銅0. 05g,六水氯化鈷 0. 5g，硼酸1. Og,四水氯化錳0. 5g)，添加乙酸調(diào)節(jié)pH，水適量；、4.植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌采用的液體培養(yǎng)基配方為乳酪蛋白胨10g、蛋白胨10g、 酵母膏5g、葡萄糖5g、吐溫80 lg、K2HP042g、醋酸鈉5g、檸檬酸二胺2g、MgSO4 · 7H20 0. 2g、MnSO4 · H2O 0. 05g、蒸餾水 1000ml ；
5.枯草芽孢桿菌采用的液體培養(yǎng)基配方為牛肉膏5g、蛋白胨10g、Nacl3g、pH 7.0。、4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種復(fù)合微生物添加劑的制備方法，其特征在于所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基配方為蜂蜜1 5g/100mL、蔗糖2 10g/100mL、蛋白胨0. 1 0. 5g/100mL、KH2PO4 0. 1 0. 5g/100mL、K2HPO4 0. 5 2g/100mL、MgSO4 · 7Η20 0· 5 2g/100mL、Nacl 0. 5 2g/100mL其余為蒸餾水。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物添加劑的應(yīng)用，其特征在于所述復(fù)合微生物添 加劑在畜禽動(dòng)物養(yǎng)殖中作為飼料添加劑。
全文摘要
一種復(fù)合微生物添加劑及其制備方法與應(yīng)用，屬于微生態(tài)調(diào)節(jié)劑在畜禽動(dòng)物養(yǎng)殖中應(yīng)用的生物材料技術(shù)領(lǐng)域。采用啤酒酵母30~60%，產(chǎn)朊假絲酵母5~30%，沼澤紅假單胞菌5~30%，植物乳桿菌5~30%，嗜酸乳桿菌5~40%，枯草芽孢桿菌5~25%。以上菌種分別經(jīng)過一級(jí)菌種培養(yǎng)，二、三級(jí)發(fā)酵，使發(fā)酵液中菌數(shù)達(dá)到8～10×108個(gè)/mL，即得復(fù)合微生物添加劑808。本產(chǎn)品經(jīng)長期實(shí)地驗(yàn)證，配方合理，功效穩(wěn)定，能夠促進(jìn)動(dòng)物生長，提高動(dòng)物產(chǎn)品產(chǎn)量，提高成活率，防病抗病，提高飼料轉(zhuǎn)化率，改善產(chǎn)品品質(zhì)。
文檔編號(hào)A23K1/16GK101919494SQ201010296819
公開日2010年12月22日 申請(qǐng)日期2010年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月30日
發(fā)明者劉美娜, 崔國臣 申請(qǐng)人:大連三科生物工程有限公司