專利名稱：一種三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物肥料領(lǐng)域，尤其涉及一種三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物 菌肥。
背景技術(shù)：
隨著人們生活水平的提高，農(nóng)產(chǎn)品的安全性和品質(zhì)受到前所未有的關(guān)注。病蟲害 生物防治與增產(chǎn)一直是農(nóng)作物生長(zhǎng)所關(guān)心的兩大問(wèn)題。近幾年來(lái)，隨著溫室、大棚蔬菜種植 面積的迅速擴(kuò)大，霜霉病、枯萎病、根結(jié)線蟲等病蟲害的發(fā)生在逐年加重。黃瓜霜霉病是黃 瓜生產(chǎn)中一種常發(fā)性嚴(yán)重病害，俗稱“跑馬病”，在適宜發(fā)病的環(huán)境下，病害發(fā)展極快，十幾 天內(nèi)就可使植株枯死，一般減產(chǎn)20-50%，嚴(yán)重時(shí)整田毀滅，是世界范圍內(nèi)溫濕性地區(qū)發(fā)生的 重要病害；根結(jié)線蟲寄主分布很廣，我國(guó)各地均有發(fā)生。寄主植物較多，如黃瓜、絲瓜、苦瓜、 冬瓜、西瓜、甜瓜、番茄、辣椒、茄子等多種作物，輕者減產(chǎn)10%左右，重者減產(chǎn)達(dá)60 70%，甚 至造成全棚毀種。它不僅直接影響蔬菜作物的生長(zhǎng)發(fā)育，還可通過(guò)根結(jié)線蟲的危害，導(dǎo)致或 加劇鐮刀枯萎病的發(fā)生，促使植株快速死亡，給防治工作帶來(lái)諸多困難。目前，防治方法仍 是依靠化學(xué)農(nóng)藥防治，國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有使用微生物活菌制劑能夠有效防治霜霉病、枯萎病、根 結(jié)線蟲?；瘜W(xué)農(nóng)藥用量加大，不僅嚴(yán)重污染環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品安全，而且大量殺傷害蟲天敵，引 起農(nóng)田生態(tài)平衡的惡性循環(huán)。生長(zhǎng)素在植物體內(nèi)普遍存在，雖含量極微，但它是植物生長(zhǎng)所必需的物質(zhì)，研究表 明，合理的應(yīng)用植物生長(zhǎng)物質(zhì)的生產(chǎn)效果甚至比栽培與育種快得多。玉米素即屬于植物 細(xì)胞分裂素類生長(zhǎng)物質(zhì)。專利查新表明，美國(guó)從嫩玉米中提取天然細(xì)胞分裂素-玉米素， 60000kg嫩玉米中僅含有Ig玉米素，產(chǎn)品成本極高、產(chǎn)量極低；在美國(guó)玉米素化學(xué)合成工藝 繁雜，提取困難，化學(xué)試劑商店玉米素售價(jià)383美元每0. 5mg,折合人民幣76000元/g，因玉 米素價(jià)格昂貴無(wú)法在農(nóng)作物生產(chǎn)上使用，大多只有在盆栽上用于細(xì)胞分裂素作用機(jī)制方面 的科學(xué)研究。本發(fā)明人通過(guò)大量篩選研究試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)地衣芽孢桿菌CGMCC No. 1009能夠分 泌出植物細(xì)胞分裂素-玉米素，并申請(qǐng)了名稱為“用于產(chǎn)生植物細(xì)胞分裂素的地衣芽孢桿 菌及植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑”發(fā)明專利，專利號(hào)ZL200310114330. 5。迄今為止，國(guó)內(nèi)外尚未開發(fā)出具有防蟲、防病、促生長(zhǎng)、增產(chǎn)、提高果實(shí)品質(zhì)多種功 效的，同時(shí)可以保持生態(tài)平衡的農(nóng)業(yè)上可以接受的低成本多效微生物菌肥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，在保持生態(tài) 平衡，降低成本的同時(shí)，具有防蟲、防病、促生長(zhǎng)、增產(chǎn)、提高果實(shí)品質(zhì)的用途。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)
一種三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，由三株地衣芽孢桿菌(BACILLUS LICHENIFORMIS)分別經(jīng)過(guò)三級(jí)液體發(fā)酵達(dá)到放罐標(biāo)準(zhǔn)，再將上述的三株地衣芽孢桿菌經(jīng) 發(fā)酵所得的發(fā)酵液混合加工而成，所述的三株地衣芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌BL-I CGMCCNo. 1009菌株、地衣芽孢桿菌BL-8 CGMCC No. 3925菌株和地衣芽孢桿菌BL-16 CGMCC No. 1379 菌株。所述的三株地衣芽孢桿菌的培養(yǎng)過(guò)程均包括以下步驟
1)首先，將地衣芽孢桿菌接種于斜面培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，所獲斜面菌種 在0-4°C的溫度下保存，在一年內(nèi)使用，所述的斜面培養(yǎng)基的配方包括以下重量百分比 的原料葡萄糖1-3%,蛋白胨0. 1-0. 5%，酵母粉0. 3-0. 5%，牛肉膏0. 3-0. 7%，(NH4)2HPO4 0. 3-0. 5%, K2HPO2 0. 03-0. 05%, MgSO4 · 7H20 0. 02-0. 05%, NaCl 0. 1-0. 6%, MnS04 0. 001-0. 003%，余量為水；
2)然后，將上一步所得菌種置于搖床的培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)24-30h，搖床轉(zhuǎn)速 為200轉(zhuǎn)/min (rpm),所述的搖床的培養(yǎng)基的配方包括以下重量百分比的原料葡萄糖 2-6%,豆餅粉2-5%,棉餅粉1-3%,蛋白胨0. 1-0. 5%,酵母粉0. 3-0. 5%,牛肉膏0. 3-0. 7%, (NH4)2HPO4 0. 3-0. 5%, K2HPO2 0. 03-0. 05%, MgSO4 · 7H20 0. 02-0. 05%, NaCl 0. 1-0. 6%, MnS04 0. 001-0. 003%，余量為水。所述的三級(jí)液體發(fā)酵時(shí)的培養(yǎng)基的配方包括以下重量百分比的原料葡萄糖 2-6%，豆餅粉2-5%，玉米粉1-3%，棉餅粉1-3%，蛋白胨0. 1-0. 5%，酵母粉0. 3-0. 5%，牛肉 膏 0. 3-0. 7%, (NH4)2HPO4 0. 3-0. 5%, K2HPO2 0. 03-0. 05%, MgSO4 · 7H20 0. 02-0. 05%, NaCl 0. 1-0. 6%, MnS04 0. 001-0. 003%，余量為水。所述的三級(jí)液體發(fā)酵包括以下步驟
1)一級(jí)液體發(fā)酵將培養(yǎng)基加入小型發(fā)酵罐中進(jìn)行高溫滅菌，滅菌溫度為121°c，壓力 為1. Okg/cm2，保壓30min，pH值控制在消毒前為7. 5，消毒后為6. 5，待溫度為35°C時(shí)往其中 接種搖瓶培養(yǎng)后所獲得菌液體積的3%，發(fā)酵時(shí)罐壓為0. 2kg/cm2，通氣量為1:0. 8v/v/min, 比例符號(hào)前面的數(shù)字1代表發(fā)酵罐的體積，后面的數(shù)字代表通入空氣的體積，培養(yǎng)24-30h， 作為一級(jí)種子液；
2)二級(jí)液體發(fā)酵對(duì)中型發(fā)酵罐、小型發(fā)酵罐與中型發(fā)酵罐接種管道進(jìn)行消毒，進(jìn)氣 閥內(nèi)壓力為1. 2kg/cm2，保壓30min，然后冷卻，發(fā)酵控制條件同上一步，得到二級(jí)種子液；
3)三級(jí)液體發(fā)酵將二級(jí)種子液按1:100的比例壓到大型發(fā)酵罐中，通氣量為1:0.8v/ v/min，培養(yǎng)66 — 72h，當(dāng)檢查無(wú)雜菌，95%以上的菌體形成芽孢，即可終止培養(yǎng)。所述的地衣芽孢桿菌BL-I菌株的培養(yǎng)、三級(jí)液體發(fā)酵過(guò)程中采用的溫度為 35士 1°C，停止發(fā)酵，用液相色譜儀(HPLC)檢測(cè)的玉米素含量> IOppm作為放罐標(biāo)準(zhǔn)。所述的地衣芽孢桿菌BL-8菌株的培養(yǎng)、三級(jí)液體發(fā)酵過(guò)程中采用的溫度為 37士 1°C，停止發(fā)酵，用血球計(jì)數(shù)板方法檢測(cè)的芽孢含量> 50億/mL作為放罐標(biāo)準(zhǔn)。所述的地衣芽孢桿菌BL-16菌株的培養(yǎng)、三級(jí)液體發(fā)酵過(guò)程中采用的溫度為 32士 1°C，停止發(fā)酵，用血球計(jì)數(shù)板方法檢測(cè)的芽孢含量> 100億/mL作為放罐標(biāo)準(zhǔn)。所述的三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，活菌含量> 50億/mL，玉米素 含量彡8μ g/mL。本發(fā)明的有益效果為微生物農(nóng)藥殺菌劑地衣芽孢桿菌BL-16菌株，對(duì)多種作物、 蔬菜瓜果、花卉等植物真菌性、細(xì)菌性病害具有很好的防治作用(例如枯萎病、霜霉病、 青枯病、軟腐病等)；天然植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑地衣芽孢桿菌BL-I菌株，含有以植物細(xì)胞分裂 素-玉米素為主的多種促植物生長(zhǎng)物質(zhì)，具有促進(jìn)葉綠素形成，增強(qiáng)光合作用，刺激植物細(xì)胞分裂，加速植物新陳代謝和蛋白質(zhì)合成，促使作物早熟豐產(chǎn)，增加瓜菜的含糖量，提高植 物抗病抗衰抗寒能力；微生物農(nóng)藥殺蟲劑地衣芽孢桿菌BL-8菌株，對(duì)多種蔬菜瓜果根結(jié) 線蟲具有很好的防治作用，對(duì)白粉虱、棉鈴蟲、煙青蟲、小菜蛾具有很好的趨避作用；本產(chǎn)品 的活菌含量高，施入土壤后，活菌生長(zhǎng)發(fā)育快，適應(yīng)性強(qiáng)，很快得到繁殖，迅速增加根際土壤 的有益微生物菌群，促進(jìn)植物根系營(yíng)養(yǎng)快速吸收，提高土壤肥力，增強(qiáng)土壤滲水、保水、透氣 性，促進(jìn)根系營(yíng)養(yǎng)快速吸收，促使瓜果早熟豐產(chǎn)，提高果品質(zhì)量；本發(fā)明對(duì)蔬菜瓜果、大田作 物、園林花卉等多種植物具有很好的促生長(zhǎng)增產(chǎn)、防蟲防病作用；產(chǎn)品對(duì)人體安全，不污染 環(huán)境。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例1
本發(fā)明實(shí)施例所述的一種三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，由地衣芽孢桿菌 BL-I CGMCC No. 1009菌株、地衣芽孢桿菌BL_8 CGMCC No. 3925菌株和地衣芽孢桿菌BL-16 CGMCC No. 1379菌株分別經(jīng)過(guò)三級(jí)液體發(fā)酵達(dá)到放罐標(biāo)準(zhǔn)，再將上述的三株地衣芽孢桿菌 經(jīng)發(fā)酵所得的發(fā)酵液混合加工而成。所述的三株地衣芽孢桿菌的培養(yǎng)過(guò)程均包括以下步驟
1)首先，將地衣芽孢桿菌接種于第一培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，所獲斜面菌種在 0_4°C的溫度下保存，在一年內(nèi)使用，所述的培養(yǎng)基的配方包括以下重量百分比的原料葡 萄糖 2%,蛋白胨 0. 3%,酵母粉 0. 4%,牛肉膏 0. 5%, (NH4) 2ΗΡ04 0 . 4%, K2HPO2 0. 04%, MgSO4 · 7H20 0. 04%, NaCl 0. 4%, MnSO4 0. 002%，余量為水(補(bǔ)足 100%)；
2)然后，將上一步所得菌種置于搖床的培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)24-30h，搖床轉(zhuǎn)速為 200rpm，所述的搖床的培養(yǎng)基的配方包括以下重量百分比的原料葡萄糖3%，豆餅粉3%，棉 餅粉 2%,蛋白胨 0. 3%,酵母粉 0. 4%，牛肉膏 0. 5%, (NH4) 2ΗΡ04 0 . 4%, K2HPO2 0. 04%, MgSO4 · 7H20 0. 04%, NaCl 0. 4%, MnSO4 0.002%，余量為水。所述的三級(jí)液體發(fā)酵包括以下步驟
1)一級(jí)液體發(fā)酵將培養(yǎng)基加入500L種子發(fā)酵罐中進(jìn)行高溫滅菌，滅菌溫度為121°C， 壓力為1. Okg/cm2，保壓30min，pH值控制在消毒前為7. 5，消毒后為6. 5，待溫度為35°C時(shí) 往其中接種搖瓶培養(yǎng)后所獲得菌液體積的3%，發(fā)酵時(shí)罐壓為0. 2kg/cm2，通氣量為1:0. 8v/ v/min,比例符號(hào)前面的數(shù)字1代表發(fā)酵罐的體積，后面的數(shù)字代表通入空氣的體積，培養(yǎng) 24h，作為下一步驟的菌種源；
2)二級(jí)液體發(fā)酵對(duì)4000L種子發(fā)酵罐、500L種子發(fā)酵罐與4000L種子發(fā)酵罐接種管 道進(jìn)行消毒，進(jìn)氣閥內(nèi)壓力為1.2kg/cm2，保壓30min，然后冷卻，發(fā)酵控制條件同上一步，得 到下一步驟的菌種源；
3)三級(jí)液體發(fā)酵使用步驟2的菌種液作為菌種源，按1:100的比例壓到20000L種 子發(fā)酵罐中，通氣量為1:0. 8v/v/min，每小時(shí)登記一次罐溫、通氣量、罐壓，在接種后12h開 始，每4h取樣進(jìn)行鏡檢，測(cè)定玉米素含量、pH值，總共培養(yǎng)70h，當(dāng)檢查無(wú)雜菌，95%以上的 菌體形成芽孢，即可終止培養(yǎng)。所述的三級(jí)液體發(fā)酵時(shí)的培養(yǎng)基的配方包括以下重量百分比的原料葡萄糖5%，豆餅粉3%，玉米粉2%，棉餅粉2%，蛋白胨0. 3%，酵母粉0. 5%，牛肉膏0. 5%，(NH4) 2ΗΡ04 0 . 4%， K2HPO2 0. 034%, MgSO4 · 7H20 0. 03%, NaCl 0. 5%, MnS04 0. 002%，余量為水(補(bǔ)足 100%)。所述的地衣芽孢桿菌BL-I菌株的培養(yǎng)、三級(jí)液體發(fā)酵過(guò)程中采用的溫度為 35 士 1°C，三級(jí)液體發(fā)酵以鏡檢測(cè)的玉米素含量彡IOppm (10 μ g/mL)作為放罐標(biāo)準(zhǔn)。所述的地衣芽孢桿菌BL-8菌株的培養(yǎng)、三級(jí)液體發(fā)酵過(guò)程中采用的溫度為 32士 1°C，三級(jí)液體發(fā)酵以鏡檢測(cè)的芽孢含量> 50億/mL作為放罐標(biāo)準(zhǔn)。所述的地衣芽孢桿菌BL-16菌株的培養(yǎng)、三級(jí)液體發(fā)酵過(guò)程中采用的溫度為 37士 1°C，三級(jí)液體發(fā)酵以鏡檢測(cè)的芽孢含量> 100億/mL作為放罐標(biāo)準(zhǔn)。所述的三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，活菌含量> 50億/mL，玉米素 含量彡8μ g/mL。本發(fā)明所述的地衣芽孢桿菌BL-I于2003年9月24日送往中國(guó)微生物菌種 保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，其建議的分類名稱為地衣芽孢桿菌(BACILLUS LICHENIFORMIS)，其登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCC No. 1009，該菌種特性細(xì)胞桿狀，革蘭氏陽(yáng)性， 大小為0.8Χ1.5-3.5μπι，產(chǎn)生近中生的橢圓狀芽孢，孢囊稍膨大。細(xì)胞內(nèi)無(wú)聚-β-羚 基丁酸鹽(PHB )穎拉.在肉汁培養(yǎng)基上的菌落為扁平、邊緣不整齊、白色、表面粗糙皺褶， 24 h后菌落直徑為3 mm。產(chǎn)生乙酰甲基甲醉(V-P應(yīng)陽(yáng)性)，pH5. 4。接觸酶陽(yáng)性。卵磷脂 陣陽(yáng)性，還原硝酸鹽。在7 % NaCl和pH5.7中生長(zhǎng)，營(yíng)兼性厭氧生活。從葡萄糖、木糖和 甘露酵產(chǎn)酸，但不從阿拉伯糖產(chǎn)酸。石蕊牛奶呈還原胨化反應(yīng)，分解淀粉和酪素，并消耗檸 稼酸鹽；所述的地衣芽孢桿菌BL-8于2010年6月17日送往中國(guó)微生物菌種保藏管理委員 會(huì)普通微生物中心保藏，其建議的分類名稱為地衣芽孢桿菌(BACILLUS LICHENIFORMIS), 其登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCC No. 3925，該菌種特性同所述的地衣芽孢桿菌BL-I ；所述的地衣 芽孢桿菌BL-16于2010年5月27日送往中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心 保藏，其建議的分類名稱為地衣芽孢桿菌(BACILLUS LICHENIFORMIS)，其登記入冊(cè)編號(hào)為 CGMCC No. 1379，該菌種特性同所述的地衣芽孢桿菌BL-I。毒性試驗(yàn)
毒性試驗(yàn)表明地衣芽孢桿菌對(duì)人體安全、無(wú)害。地衣芽孢桿菌已被列為益生菌，可供 應(yīng)用例1
北京市農(nóng)林科學(xué)院植保環(huán)保研究所對(duì)黃瓜大棚進(jìn)行了試驗(yàn)。使用實(shí)施例1中獲得的三 株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，將其分別稀釋300倍、400倍、500倍后，按每畝施 用30kg稀釋液的施用量均勻噴灑在黃瓜及葉片上。統(tǒng)計(jì)其產(chǎn)量，同時(shí)以噴灑清水和使用市面上購(gòu)來(lái)的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)進(jìn)劑“云大120” 2000倍作為對(duì)照。結(jié)果如表2所示 表2多效微生物菌肥對(duì)黃瓜產(chǎn)量的影響
從表2可以看出，本發(fā)明的多效微生物菌肥對(duì)黃瓜有很好的促進(jìn)生長(zhǎng)作用，增產(chǎn)幅度 最高可達(dá)34. 8%，表2中數(shù)字為4次重復(fù)平均值，可在黃瓜定植緩苗后第一次施藥，從初花 期開始，每隔7天噴施1次，連續(xù)噴4次；施藥濃度以300倍至400倍為宜。
應(yīng)用例2
江蘇省農(nóng)藥檢定所試驗(yàn)對(duì)黃瓜大棚進(jìn)行了試驗(yàn)。使用實(shí)施例1中獲得的三株地衣芽孢 桿菌制作的多效微生物菌肥，將其分別稀釋500倍、400倍、300倍后，按每畝施用30kg稀釋 液的施用量噴灑在黃瓜植株的葉子上，每隔7天噴灑一次，統(tǒng)計(jì)其產(chǎn)量，同時(shí)以噴灑清水和 使用助壯素稀釋300倍作為對(duì)照。結(jié)果如表3所示
表3多效微生物菌肥對(duì)黃瓜霜霉病和炭疽病抑制效果
從表3可以看出，本發(fā)明的多效微生物菌肥稀釋300倍液對(duì)黃瓜霜霉病和炭疽病具有 很好的抑制作用，最好的抑制率可達(dá)到64. 1%，對(duì)白粉病也有同樣的抑制效果。
應(yīng)用例3
中國(guó)農(nóng)科院鄭州果樹研究所對(duì)金帥蘋果進(jìn)行了試驗(yàn)，使用實(shí)施例1中獲得的三株地衣 芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，將其分別稀釋400倍、300倍、200倍后，按每畝施用45kg 稀釋液的施用量噴灑在蘋果及葉片上，幼果初期，果實(shí)膨大期各噴一次。在幼果初期噴灑前 用卡尺測(cè)量果實(shí)直徑、橫徑并記錄，噴灑后用測(cè)量果實(shí)直徑、橫徑并記錄，在果實(shí)膨大期(約 幼果初期噴灑日2周)進(jìn)行第二次噴施后再次測(cè)量果實(shí)直徑、橫徑并記錄。結(jié)果如表4所 示
表4多效微生物菌肥對(duì)金帥蘋果果實(shí)增長(zhǎng)的影響
從表4可以看出施用各濃度的本發(fā)明的菌肥均比對(duì)照果實(shí)增長(zhǎng)快，本發(fā)明的菌肥稀釋 300倍效果最好，直徑增長(zhǎng)率比對(duì)照增長(zhǎng)35. 86%，稀釋400倍次之，稀釋200倍增長(zhǎng)稍慢。
應(yīng)用例4
河北省廊坊市植保植檢站對(duì)實(shí)施例1中獲得的三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物 菌肥(粉劑)在番茄根結(jié)線蟲上進(jìn)行防治試驗(yàn)，共設(shè)5個(gè)處理，本發(fā)明的菌肥20kg/畝、25 kg /畝、30kg/畝、6%奧羅菔茲微乳劑和1. 8%阿維菌素，第一次施藥后2個(gè)月進(jìn)行調(diào)查并記錄 結(jié)果，然后第二次施藥后1個(gè)月內(nèi)再次進(jìn)行調(diào)查并記錄結(jié)果。結(jié)果如表5所示 表5多效微生物菌肥防治溫室番茄根結(jié)線蟲病藥效調(diào)查
從表5可以看出，在第一次施藥后2個(gè)月本發(fā)明的菌肥20kg/畝、25kg/畝、30kg/畝、 6%奧羅菔茲微乳劑和1. 8%阿維菌素的防效依次為62. 9%,70. 3%,77. 6%、71%、64% ；第二次施藥1個(gè)月后的防效依次為70. 4%,76. 9%,84. 9%,80. 2%,71. 2%。第一次施藥2個(gè)月后，各處理 均有線蟲病發(fā)生，本發(fā)明的菌肥(粉劑)30kg/畝和6%奧羅菔茲微乳劑750克/畝的防效較 高，分別為77. 6%和71% ；第二次施藥一個(gè)月后，本發(fā)明的菌肥(粉劑)30kg/畝制劑量處理 的防效達(dá)到84. 9%，有效抑制了根結(jié)線蟲的發(fā)生及危害。 將本發(fā)明的微生物菌肥(水劑)產(chǎn)品按照與應(yīng)用例1相同的稀釋倍數(shù)和施用方法分 別在新疆、北京、山東、河南、云南浙江、江蘇、山西、內(nèi)蒙、河北、吉林、黑龍江、廣西、海南、福 建等地進(jìn)行了田間試驗(yàn)示范，試驗(yàn)結(jié)果表明該產(chǎn)品對(duì)小麥、玉米、水稻、大豆、花生、棉花、 蘋果、香梨、荔枝、桂圓、芒果、柑橘、葡萄、香蕉、西瓜、甜瓜、番茄、黃瓜、辣椒、茄子、甘藍(lán)、人 參、茶葉、煙葉、啤酒花、苜蓿、月季花、海棠花、草坪、銀杏樹、油松等多種植物均有很好的促 生長(zhǎng)、防蟲、防病、增產(chǎn)作用，同時(shí)產(chǎn)品活菌在土壤中繁殖快、適應(yīng)性強(qiáng)，迅速增加根際土壤 的有益微生物菌群，有效控制土傳病害、蟲害發(fā)生。
權(quán)利要求
一種三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，其特征在于其由三株地衣芽孢桿菌分別經(jīng)過(guò)三級(jí)液體發(fā)酵達(dá)到放罐標(biāo)準(zhǔn)，再將上述的三株地衣芽孢桿菌經(jīng)發(fā)酵所得的發(fā)酵液混合加工而成，所述的三株地衣芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌BL 1 CGMCC No.1009菌株、地衣芽孢桿菌BL 8 CGMCC No. 3925菌株和地衣芽孢桿菌BL 16 CGMCC No.1379菌株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，其特征在于所 述的三株地衣芽孢桿菌的培養(yǎng)過(guò)程均包括以下步驟1)將地衣芽孢桿菌接種于斜面培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，所獲斜面菌種在0-4°C 的溫度下保存，在一年內(nèi)使用，所述的斜面培養(yǎng)基的配方包括以下重量百分比的原料葡萄 糖 1_3%，蛋白胨 0. 1-0. 5%，酵母粉 0. 3-0. 5%，牛肉膏 0. 3-0. 7%, (NH4)2HPO4 0. 3-0. 5%, K2HPO2 0. 03-0. 05%, MgSO4 · 7H20 0. 02-0. 05%, NaCl 0. 1-0. 6%,以及 MnS04 0. 001-0. 003%，余量為 水；2)將上一步所得菌種置于搖床的培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)24-30h，搖床轉(zhuǎn)速為200rpm, 所述的搖床的培養(yǎng)基的配方包括以下重量百分比的原料葡萄糖2-6%，豆餅粉2-5%，棉餅 粉 1-3%，蛋白胨 0. 1-0. 5%，酵母粉 0. 3-0. 5%，牛肉膏 0. 3-0. 7%, (NH4)2HPO4 0. 3-0. 5%, K2HPO2 0. 03-0. 05%, MgSO4 · 7H20 0. 02-0. 05%, NaCl 0. 1-0. 6%,以及 MnSO4 0. 001-0. 003%，余量為水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，其特征在于 所述的三級(jí)液體發(fā)酵時(shí)的培養(yǎng)基的配方包括以下重量百分比的原料葡萄糖2-6%，豆餅 粉2-5%，玉米粉1-3%，棉餅粉1-3%，蛋白胨0. 1-0. 5%，酵母粉0. 3-0. 5%，牛肉膏0. 3-0. 7%， (NH4)2HPO4 0. 3-0. 5%, K2HPO2 0. 03-0. 05%, MgSO4 · 7H20 0. 02-0. 05%, NaCl 0. 1-0. 6%,以及 MnSO4 0. 001-0. 003%，余量為水。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，其特征在于所 述的三級(jí)液體發(fā)酵包括以下步驟1)一級(jí)液體發(fā)酵將培養(yǎng)基加入小型發(fā)酵罐中進(jìn)行高溫滅菌，滅菌溫度為121°C，壓力 為1. Okg/cm2，保壓30min，pH值控制，消毒前為7. 5，消毒后為6. 5，待溫度為35°C時(shí)往其中 接種搖瓶培養(yǎng)后所獲得菌液體積的3%，發(fā)酵時(shí)罐壓為0. 2kg/cm2，通氣量為1:0. 8v/v/min, 比例符號(hào)前面的數(shù)字1代表發(fā)酵罐的體積，后面的數(shù)字代表通入空氣的體積，培養(yǎng)24-30h， 作為一級(jí)種子液；2)二級(jí)液體發(fā)酵對(duì)中型發(fā)酵罐、小型發(fā)酵罐與中型發(fā)酵罐接種管道進(jìn)行消毒，進(jìn)氣 閥內(nèi)壓力為1. 2kg/cm2，保壓30min，然后冷卻，發(fā)酵控制條件同上一步，得到二級(jí)種子液；3)三級(jí)液體發(fā)酵將二級(jí)種子液按1:100的比例壓到大型發(fā)酵罐中，通氣量為1:0.8v/ v/min,培養(yǎng)66-72h，當(dāng)檢查無(wú)雜菌，95%以上的菌體形成芽孢，即可終止培養(yǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，其特征在于所 述的地衣芽孢桿菌BL-I菌株的培養(yǎng)的三級(jí)液體發(fā)酵過(guò)程中采用的溫度為35士 1°C，三級(jí)液 體發(fā)酵以液相色譜儀檢測(cè)的玉米素含量> IOppm作為放罐標(biāo)準(zhǔn)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，其特征在于所 述的地衣芽孢桿菌BL-8菌株的培養(yǎng)的三級(jí)液體發(fā)酵過(guò)程中采用的溫度為32 士 1°C，三級(jí)液 體發(fā)酵以血球計(jì)數(shù)板方法檢測(cè)的芽孢含量> 50億/mL作為放罐標(biāo)準(zhǔn)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，其特征在于所述的地衣芽孢桿菌BL-16菌株的培養(yǎng)的三級(jí)液體發(fā)酵過(guò)程中采用的溫度為37士 1°C，三級(jí) 液體發(fā)酵以血球計(jì)數(shù)板方法檢測(cè)的芽孢含量> 100億/mL作為放罐標(biāo)準(zhǔn)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，其特征在于 所述的三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥的活菌含量> 50億/mL，玉米素含量 彡 8 g/mL。
全文摘要
本發(fā)明為一種三株地衣芽孢桿菌制作的多效微生物菌肥，是由三株地衣芽孢桿菌(BACILLUS LICHENIFORMIS)分別經(jīng)過(guò)三級(jí)液體發(fā)酵達(dá)到放罐標(biāo)準(zhǔn)，再將上述的三株地衣芽孢桿菌經(jīng)發(fā)酵所得的發(fā)酵液混合加工而成，所述的三株地衣芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌BL-1 CGMCC No.1009菌株、地衣芽孢桿菌BL-8 CGMCC No.3925菌株和地衣芽孢桿菌BL-16 CGMCC No.1379菌株。本發(fā)明的有益效果為本產(chǎn)品的活菌含量高，對(duì)小麥、玉米、水稻等多種作物具有很好的促生長(zhǎng)增產(chǎn)、防蟲防病作用，產(chǎn)品活菌在土壤中繁殖快、適應(yīng)性強(qiáng)，可有效控制土傳病害、蟲害發(fā)生，提高土壤肥力，提高瓜菜含糖量。
文檔編號(hào)C05G3/04GK101891548SQ20101023328
公開日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2010年7月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月21日
發(fā)明者叢日晨, 劉瑩, 程文亮, 葛翔宇, 錢華, 龍厚茹 申請(qǐng)人:神州漢邦(北京)生物技術(shù)有限公司