專利名稱：：一種花葉夾竹桃的組織培養(yǎng)方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及植物的組織培養(yǎng)法，具體地說，是花葉夾竹桃的組織培養(yǎng)法。
背景技術：
：花葉夾竹桃(^r/鵬cv.Variegata)是夾竹桃科夾竹桃屬常綠直立大灌木。原產(chǎn)于伊朗、印度、尼泊爾，我國長江以南各省區(qū)廣為栽植的常用彩葉樹種。整個植株，黃綠相間，有的葉片全黃，有的葉片黃、綠交錯。植株高達4-5米，萌蘗性強，極耐修剪。葉革質，較原種葉片略薄，花冠粉紅色，徑約5厘米，有特殊香氣，單瓣或重瓣，果長圓形，花期6-10月，常植于公園、庭院、街頭、綠地等供觀賞。為了保持植株原有性狀，必需采用無性繁殖方法繁殖，傳統(tǒng)的繁殖方法是扦插、壓條，但繁殖速度慢。由于種質資源少，傳統(tǒng)方法很難在短期內(nèi)獲得大量植株。在現(xiàn)有技術中，沒有有關花葉夾竹桃組織培養(yǎng)方法的報道。
發(fā)明內(nèi)容一種花葉夾竹桃的組織培養(yǎng)方法，它基本上由下列步驟組成步驟l:釆用經(jīng)選育的花葉夾竹桃優(yōu)良單株腋芽莖段或莖尖為外植體，經(jīng)70%酒精消毒30秒，再用0.1%的升汞溶液消毒，(一般8-10分鐘)，用無菌水沖洗3-5次；步驟2:在超凈的工作臺上，無菌條件下，將消毒的外植體接種在經(jīng)消毒的含有啟動培養(yǎng)基的玻璃瓶中，將其置于普通日光燈為光源、光照強度為1500-20001x下，每曰照光14小時，溫度22-27"C、濕度為50%-65°/，培養(yǎng)40天，分化長成試管芽苗，所述的啟動培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基加噻苯隆(TDZ)0.1-0.5毫克、6-芐基嘌呤(BA)1.0-1.5亳克和吲噪丁酸(IBA)0.02-0.1亳克；步驟3:將從步驟2中長成的芽苗，剪切，按步驟2轉接于經(jīng)消毒的含有增殖培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行增殖培養(yǎng)，不斷增殖，視繁殖生產(chǎn)規(guī)模需要達2000-5000瓶時進入下一步，所述的增殖培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基加玉米素(ZT)0.5-1.5亳克、6-節(jié)基嘌呤1.0-2.0亳克、吲噪丁酸0.05-0.2亳克和活性炭(Charcoal)1000-2000亳克；步驟4:將步驟3中培養(yǎng)的試管芽苗，剪切，按步驟2接種于經(jīng)消毒的含有壯苗培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行壯苗培養(yǎng)，30天后進入下一步，所述的壯苗培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基加玉米素(ZT)0.2-1.0亳克、6-節(jié)基嘌呤0.5-1.0亳克、吲噪丁酸0.1-0.3亳克和活性炭(Charcoal)1000-2000亳克；步驟5:將步驟4中的試管壯苗，去掉基部愈傷組織和部分葉片，留4-5片葉片，按步驟2接種于經(jīng)消毒的含有生根處理產(chǎn)生根原基培養(yǎng)的培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行生根培養(yǎng)7-12天，所述的生根處理產(chǎn)生根原基培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基加oc-萘乙酸(MA)O.2-0.5亳克、丐l哚丁酸0.4-0.8亳克和活性炭(Charcoal)2000-3000亳克；步驟6:將步驟5中生長的帶有根原基的無根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭黃心土=1:l(體積比)的基質中，澆透水，保持溫度25-28r，相對濕度85%以上，遮光(前IO天)75%，后逐漸見光，25天后生根成活,生根率達86%以上，40-50天，全光照。上述的花葉夾竹桃的組織培養(yǎng)方法，所述的基本培養(yǎng)基的配方見表1:表1:每升基本培養(yǎng)基中含有如下物質種類和質量:<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>本發(fā)明的花葉夾竹桃的組織培養(yǎng)方法，通過組織培養(yǎng)方法，能保持原植株的優(yōu)良性狀，而且繁殖速度快，能在短期內(nèi)生產(chǎn)大量優(yōu)質種苗，滿足園林綠化市場的需要。具體實施例方式實施例1.花葉夾竹桃的組織培養(yǎng)所用的基本培養(yǎng)基配方如表2表2每升基本培養(yǎng)基中含有如下物質種類和質量<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>啟動培養(yǎng)基每升基本培養(yǎng)基+TDZ0.lmg+BA1.0mg+IBA0.02mg;增殖培養(yǎng)基每升基本培養(yǎng)基+ZT0.5mg+BA1.Omg+IBA0.05mg+Charcoal1000mg;壯苗培養(yǎng)每升基本培養(yǎng)基+ZT0.2mg+BA0.5mg+IBA0.lmg+Charcoal1000mg;生根處理產(chǎn)生根原基培養(yǎng)每升基本培養(yǎng)基+NAA0.2mg+IBA0.4mg+Charcoal2000mg。將上述啟動培養(yǎng)基注入玻璃瓶中，經(jīng)高溫高壓消毒(120-125。C，1.1KG/CM2)20分鐘，待用。1、釆用經(jīng)選育的花葉夾竹桃優(yōu)良單株腋芽莖段或莖尖為外植體，經(jīng)70%酒精消毒30秒，再用0.1%的升汞溶液消毒，(8-10分鐘)，用無菌水沖洗3-5次；2、在超凈的工作臺上，無菌條件下，將消毒的外植體接種在經(jīng)消毒的含有啟動培養(yǎng)基的玻璃瓶中，將其置于普通日光燈為光源、光照強度為1500-20001x下，每日照光14小時，溫度22-27°C、濕度為50°/。-65%，培養(yǎng)40天，分化長成試管芽苗；3、將從步驟2中長成的芽苗，剪切，按步驟2轉接于經(jīng)消毒的含有增殖培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行增殖培養(yǎng)，不斷增殖，一個周期30天的繁殖倍數(shù)為4.0，生長高度達3.5cm，視繁殖生產(chǎn)規(guī)模需要達2000-5000瓶時進入下一步；4、將步驟3中培養(yǎng)的試管芽苗，剪切，按步驟2接種于經(jīng)消毒的含有壯苗培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行壯苗培養(yǎng)，30天后進入下一步；5、將步驟4中的試管壯苗，去掉基部愈傷組織和部分葉片，留4-5片葉片，按步驟2接種于經(jīng)消毒的含有生根處理產(chǎn)生根原基培養(yǎng)的培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行生根培養(yǎng)7-12天；6、將步驟5中生長的帶有根原基的無根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭黃心土=1:1(體積比)的基質中，澆透水，保持溫度25-28°C，相對濕度85%以上，遮光(前10天)75%,后逐漸見光，25天后生根成活，生根率達86%以上，40-50天，全光照，可實現(xiàn)花葉夾竹桃的工廠化生產(chǎn)。實施例2.花葉夾竹桃的組織培養(yǎng)所用的基本培養(yǎng)基配方如表3表3每升基本培養(yǎng)基中含有如下物質種類和質量:<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>啟動培養(yǎng)基每升基本培養(yǎng)基+TDZ0.5mg+BA1.5mg+IBA0.lmg;增殖培養(yǎng)基每升基本培養(yǎng)基+ZT1.5mg+BA2.0mg+IBA0.2mg+Charcoal2000mg;壯苗培養(yǎng)每升基本培養(yǎng)基+ZT1.Omg+BA1.Omg+IBA0.3mg+Charcoal2000mg;生根處理產(chǎn)生根原基培養(yǎng)每升基本培養(yǎng)基+NAA0.5mg+IBA0.5mg+Charcoal3000mg。其它步驟同實施例1.權利要求1.一種花葉夾竹桃的組織培養(yǎng)方法，其特征是它基本上由下列步驟組成步驟1采用經(jīng)選育的花葉夾竹桃優(yōu)良單株腋芽莖段或莖尖為外植體，經(jīng)70％酒精消毒30秒，再用0.1％的升汞溶液消毒，(一般8-10分鐘)，用無菌水沖洗3-5次；步驟2在超凈的工作臺上，無菌條件下，將消毒的外植體接種在經(jīng)消毒的含有啟動培養(yǎng)基的玻璃瓶中，將其置于普通日光燈為光源、光照強度為1500-20001x下，每日照光14小時，溫度22-27℃、濕度為50％-65％，培養(yǎng)40天，分化長成試管芽苗，所述的啟動培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基加噻苯隆(TDZ)0.1-0.5毫克、6-芐基嘌呤(BA)1.0-1.5毫克和吲哚丁酸(IBA)0.02-0.1毫克；步驟3將從步驟2中長成的芽苗，剪切，按步驟2轉接于經(jīng)消毒的含有增殖培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行增殖培養(yǎng)，不斷增殖，視繁殖生產(chǎn)規(guī)模需要達2000-5000瓶時進入下一步，所述的增殖培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基加玉米素0.5-1.5毫克、6-芐基嘌呤1.0-2.0毫克、吲哚丁酸0.05-0.2毫克和活性炭(Charcoal)1000-2000毫克；步驟4將步驟3中培養(yǎng)的試管芽苗，剪切，按步驟2接種于經(jīng)消毒的含有壯苗培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行壯苗培養(yǎng)，30天后進入下一步，所述的壯苗培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基加玉米素0.2-1.0毫克、6-芐基嘌呤0.5-1.0毫克、吲哚丁酸0.1-0.3毫克和活性炭(Charcoal)1000-2000毫克；步驟5將步驟4中的試管壯苗，去掉基部愈傷組織和部分葉片，留4-5片葉片，按步驟2接種于經(jīng)消毒的含有生根處理產(chǎn)生根原基培養(yǎng)的培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行生根培養(yǎng)7-12天，所述的生根處理產(chǎn)生根原基培養(yǎng)的培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基加α-萘乙酸(NAA)0.2-0.5毫克、吲哚丁酸0.4-0.8毫克和活性炭(Charcoal)2000-3000毫克；步驟6將步驟5中生長的帶有根原基的無根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭∶黃心土＝1∶1(體積比)的基質中，澆透水，保持溫度25-28℃，相對濕度85％以上，遮光(前10天)75％，后逐漸見光，25天后生根成活，生根率達86％以上，40-50天，全光照。2.根據(jù)權利要求l所述的花葉夾竹桃的組織培養(yǎng)方法，其特征是所述的基本培養(yǎng)基的配方見表l:表l:每升基本培養(yǎng)基中含有如下物質種類和質量:<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>全文摘要一種花葉夾竹桃的組織培養(yǎng)方法，采用經(jīng)選育的花葉夾竹桃優(yōu)良單株腋芽莖段為外植體，經(jīng)消毒后，接種在經(jīng)消毒的含有啟動培養(yǎng)基的玻璃瓶中，將其置于普通日光燈為光源，每日照光14小時，溫度22-27℃、濕度為50％-65％，培養(yǎng)40天，分化長成試管芽苗，長成的芽苗，剪切，轉接于經(jīng)消毒的含有增殖培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行增殖培養(yǎng)，不斷增殖，剪切后接種于經(jīng)消毒的含有壯苗培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行壯苗培養(yǎng)，30天后去掉基部愈傷組織和部分葉片，留4-5片葉片，接種于經(jīng)消毒的含有生根處理產(chǎn)生根原基培養(yǎng)的培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行生根培養(yǎng)7-12天，取出清洗，移栽到含有泥炭∶黃心土＝1∶1(體積比)的基質中，25天后生根成活，生根率達86％以上。文檔編號A01H4/00GK101406157SQ200810236240公開日2009年4月15日申請日期2008年11月27日優(yōu)先權日2008年11月27日發(fā)明者史云光,史青云,巫建新,張方亮,徐招弟,艷朱,湯榮弟,王福銀,蔣澤平,鮑榮靜申請人:江蘇農(nóng)林職業(yè)技術學院綠苑實業(yè)總公司