專利名稱：“蓮瓣蘭”的無菌播種和組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種蘭花“蓮瓣蘭”的無菌播種和組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
蓮瓣蘭特產(chǎn)于云南西部，為珍稀蘭花。其形態(tài)優(yōu)美、株型秀麗；葉片四季長青；花清麗高雅幽香，花色豐富，具有很高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。其中有不少品種為蘭花珍品，如小雪素等，千金難求。蓮瓣蘭種子小，極難發(fā)芽，分株繁殖又慢。所以建立組培苗無性系，為蓮瓣蘭珍品的繁殖提供了一條較快速的途徑是極具價(jià)值的和現(xiàn)實(shí)意義的?，F(xiàn)有技術(shù)中至今尚未見蓮瓣蘭的種子無菌萌發(fā)和組織培養(yǎng)的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種蘭花“蓮瓣蘭”的無菌播種和組織培養(yǎng)方法。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案“蓮瓣蘭”的無菌播種和組織培養(yǎng)方法，取蓮瓣蘭，經(jīng)過種子萌發(fā)、增殖培養(yǎng)、試管苗誘導(dǎo)、煉苗移栽步驟，蓮瓣蘭種子，播在基本培養(yǎng)基+BA5mg·L-1+NAA5mg·L-1的種子培養(yǎng)基上培養(yǎng)6-7個(gè)月，分化出根狀莖，將根狀莖轉(zhuǎn)入基本培養(yǎng)基+BA3mg·L-1+NAA5mg·L-1的增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，待根狀莖逐漸轉(zhuǎn)綠，部分芽分化出，將帶有芽和根狀莖叢的團(tuán)塊切割為1cm2大小，轉(zhuǎn)如基本培養(yǎng)基+BA3mg·L-1+IAA0.2mg·L-1的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，根狀莖分化出叢芽，將叢芽團(tuán)切割為2-3芽塊，接種在基本培養(yǎng)基+NAA1mg·L-1+香蕉泥20％，pH5.5的生根培養(yǎng)基上3個(gè)月，待芽長出1-數(shù)條根，苗長至5cm以上時(shí)，放在40μmol·m-1·s-1光強(qiáng)下煉苗15-30天，當(dāng)葉片伸展、植株長高且健壯時(shí)，將小苗取出，移栽在濕潤的消過毒的水苔中，蓋塑料膜保濕，保持環(huán)境溫度約25℃，通風(fēng)保濕，待試管苗長出新葉或新根可去除覆蓋膜，常規(guī)管理，上述步驟所用基本培養(yǎng)基均為花寶1號即N∶P∶K＝7∶6∶19的美國Hyponex化學(xué)公司的產(chǎn)品Hypenox1號2.5g+MS有機(jī)成分、鐵鹽和微量元素+AC 0.5g·L-1+S 2％，瓊脂固化；培養(yǎng)溫度(26±2)℃，連續(xù)光照12h·d-1，光強(qiáng)20-40umol·m-1·s-1。
上述的方法中無菌種子的萌發(fā)是摘取未開裂的蓮瓣蘭蒴果，用70％乙醇清洗，然后用75％的乙醇浸泡20s，再用0.2％HgCl2消毒30min，無菌水沖洗3次，每次10min，把蒴果放在無菌濾紙上，吸干果實(shí)表面水分，剪開蒴果，將種子均勻播在種子培養(yǎng)基上。
上述方法中增殖培養(yǎng)為5個(gè)月，根狀莖切割繼代，繼代3-4個(gè)月。
具體實(shí)施例方式下面用本發(fā)明的實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容并不以此為限。
實(shí)施例1植物名稱蓮瓣蘭(Cymbidium lianpan Tang et Wang)材料類別種子培養(yǎng)條件基本培養(yǎng)基為花寶1號(Hypenox 1號，N∶P∶K＝7∶6∶19，美國Hyponex化學(xué)公司產(chǎn)品)2.5g+MS有機(jī)成分、鐵鹽和微量元素+AC 0.5g·L-1+S 2％。瓊脂固化。
①種子播種培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基+BA 5mg·L-1+NAA 5mg·L-1；②增殖培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基+BA3mg·L-1+NAA 5mg·L-1；③芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基+BA3mg·L-1+IAA0.2mg·L-1；④生根培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基+NAA1mg·L-1+香蕉泥20％，培養(yǎng)基pH5.5，培養(yǎng)溫度(26±2)℃，連續(xù)光照12h·d-1，光強(qiáng)20-40umol·m-1·s-1。
生長與分化情況1、無菌種子的萌發(fā)摘取未開裂的蓮瓣蘭蒴果，用沾有70％乙醇的紗布仔細(xì)檫凈果實(shí)上的灰塵與雜物，然后用75％的乙醇浸泡20s，再用0.2％HgCl2消毒30min，無菌水沖洗3次，每次10min。把蒴果放在無菌濾紙上，吸干果實(shí)表面水分，剪開蒴果，將種子均勻播在培養(yǎng)基①上，蓮瓣蘭種子培養(yǎng)6個(gè)月左右，萌發(fā)長出1-數(shù)個(gè)乳白色原球莖，以后轉(zhuǎn)綠；又經(jīng)過30d的培養(yǎng)就能分化出根狀莖。種子在光或暗培養(yǎng)下，萌發(fā)時(shí)間和效果差異不明顯。
2、增殖培養(yǎng)將根狀莖轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基②上培養(yǎng)，約5個(gè)月增殖率為1∶3-5(依品種不同而異)。這些根狀莖可切割繼代，繼代用約3-4個(gè)月，并隨繼代次數(shù)的增加，增殖率也增加，達(dá)到快速繁殖的目的。
3、試管苗的誘導(dǎo)根狀莖叢轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基②上，根狀莖逐漸轉(zhuǎn)綠，同時(shí)有部分芽分化出，將帶有芽和根狀莖叢的團(tuán)塊切割為面積約為1cm2，轉(zhuǎn)如培養(yǎng)基③上，根狀莖分化出叢芽，將叢芽團(tuán)切割為2-3芽塊，接種在培養(yǎng)基④上，經(jīng)過3個(gè)月左右培養(yǎng)，芽長出1-數(shù)條根，同時(shí)長高約5cm左右，生根率達(dá)98％。
4、煉苗移栽當(dāng)組培苗長至5cm以上時(shí)，放在40μmol·m-1·s-1光強(qiáng)下煉苗15-30d。當(dāng)葉片伸展、植株長高且健壯時(shí)，打開瓶蓋，小心將小苗取出，仔細(xì)去除根部瓊脂，移栽在濕潤但擰不出水的消過毒的水苔中，蓋塑料膜保濕，保持環(huán)境溫度約25℃。移后1周要注意通風(fēng)保濕，待試管苗長出新葉或新根可去除覆蓋膜，常規(guī)管理。移栽成活率可達(dá)90％。
本發(fā)明的優(yōu)異效果在于蓮瓣蘭特產(chǎn)于云南西部，為珍稀蘭花。其形態(tài)優(yōu)美、株型秀麗；葉片四季長青；花清麗高雅幽香，花色豐富，具有很高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。其中有不少品種為蘭花珍品(如小雪素等)，千金難求。蓮瓣蘭種子小，極難發(fā)芽，分株繁殖又慢。本發(fā)明蓮瓣蘭組培苗無性系的建立，為這些珍品的繁殖提供了一條較快速的途徑。經(jīng)查資料表明，關(guān)于蓮瓣蘭的種子無菌萌發(fā)和組織培養(yǎng)至今尚未見報(bào)道。
權(quán)利要求
1.“蓮瓣蘭”的無菌播種和組織培養(yǎng)方法，取蓮瓣蘭，經(jīng)過種子萌發(fā)、增殖培養(yǎng)、試管苗誘導(dǎo)、煉苗移栽步驟，其特征在于取蓮瓣蘭種子，播在基本培養(yǎng)基+BA 5mg·L-1+NAA 5mg·L-1的種子培養(yǎng)基上培養(yǎng)6-7個(gè)月，分化出根狀莖，將根狀莖轉(zhuǎn)入基本培養(yǎng)基+BA3mg·L-1+NAA5mg·L-1的增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，待根狀莖逐漸轉(zhuǎn)綠，部分芽分化出，將帶有芽和根狀莖叢的團(tuán)塊切割為1cm2大小，轉(zhuǎn)如基本培養(yǎng)基+BA3mg·L-1+IAA0.2mg·L-1的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，根狀莖分化出叢芽，將叢芽團(tuán)切割為2-3芽塊，接種在基本培養(yǎng)基+NAA1mg·L-1+香蕉泥20％，pH5.5的生根培養(yǎng)基上3個(gè)月，待芽長出1-數(shù)條根，苗長至5cm以上時(shí)，放在40μmol·m-1·s-1光強(qiáng)下煉苗15-30天，將小苗取出，移栽在濕潤的消毒水苔中，保濕，環(huán)境溫度保持25℃。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于基本培養(yǎng)基為花寶1號即N∶P∶K＝7∶6∶19的美國Hyponex化學(xué)公司的產(chǎn)品2.5g+MS有機(jī)成分、鐵鹽和微量元素+AC 0.5g·L-1+S 2％，瓊脂固化；培養(yǎng)溫度(26±2)℃，連續(xù)光照12h·d-1，光強(qiáng)20-40umol·m-1·s-1。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于摘取未開裂的蓮瓣蘭蒴果，用70％乙醇清洗，然后用75％的乙醇浸泡20s，再用0.2％HgCl2消毒30min，無菌水沖洗3次，每次10min，把蒴果放在無菌濾紙上，吸干果實(shí)表面水分，剪開蒴果，將種子均勻播在種子培養(yǎng)基上。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，增殖培養(yǎng)5個(gè)月，根狀莖切割繼代，繼代3-4個(gè)月。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于練苗移栽是在葉片伸展、植株長高且健壯時(shí)，將小苗取出，移栽水苔中，蓋塑料膜通風(fēng)保濕，待試管苗長出新葉或新根可去除覆蓋膜，常規(guī)管理。
全文摘要
提供蘭花“蓮瓣蘭”的無菌播種和組織培養(yǎng)方法。以蓮瓣蘭為原料，包括種子萌發(fā)、增殖培養(yǎng)、試管苗誘導(dǎo)、煉苗移栽等步驟。蓮瓣蘭為珍稀蘭花，具有很高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，其中有不少品種為蘭花珍品，如小雪素等，千金難求。蓮瓣蘭種子小，極難發(fā)芽，分株繁殖又慢。本發(fā)明蓮瓣蘭組培苗無性系的建立，為蓮瓣蘭的繁殖提供了一條快速途徑。
文檔編號A01C1/00GK101066041SQ20071006594
公開日2007年11月7日 申請日期2007年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月8日
發(fā)明者龍春林, 程治英, 羅吉鳳 申請人:中國科學(xué)院昆明植物研究所