專利名稱：具有四片葉子的三葉草新品種及其繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有四片葉子的三葉草新品種及其無(wú)性繁殖方法。
在花語(yǔ)中，具有四片葉子的三葉草意味著“幸運(yùn)”、“希望”、“愛(ài)情”、“熱情”，因此很多人想得到具有四片葉子的三葉草，但是找到野生型的具有四片葉子的三葉草比較困難。這樣，既然具有四片葉子的三葉草是稀有的并且具有裝飾價(jià)值，它們也就具有巨大的商業(yè)價(jià)值。因此，具有四片葉子的三葉草可以用于各種途徑，比如裝飾品、公關(guān)贈(zèng)品、禮物、壓縮花和干花，以吸引消費(fèi)者。所以，需要開(kāi)發(fā)具有四片葉子的三葉草，并且要求它能夠比較容易地適應(yīng)新環(huán)境、生長(zhǎng)速度快。
韓國(guó)傳統(tǒng)的野生型的三葉草，偶爾會(huì)有四片葉子。該品種具有卵形的綠葉、相對(duì)較短的莖，但是具有較強(qiáng)的覆蓋地面的能力。由于該品種只有在自然突變的情況下才會(huì)有四片葉子，因而大量生產(chǎn)具有四片葉子的三葉草比較困難。
另一方面，從其他國(guó)家引入韓國(guó)的具有三片葉子的三葉草是作為飼料來(lái)種植和使用的，包括可以買(mǎi)到的紅三葉草，比如TR2000、泰特斯(Titus)、肯藍(lán)德(Kenland)、安特藍(lán)斯(Atlas)。但是，這些品種不但難以種植，并且很難適應(yīng)韓國(guó)的環(huán)境。因此，需要開(kāi)發(fā)能夠適應(yīng)韓國(guó)環(huán)境的具有四片葉子的三葉草新品種，并且能夠很快的生長(zhǎng)、具有較強(qiáng)的生命力。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種具有四片葉子的三葉草新品種。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種繁殖具有四片葉子的三葉草新品種的方法。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第一個(gè)目的，提供了一種具有四片葉子的三葉草。本發(fā)明的一個(gè)方面，從野生型的三葉草上切下一條匍匐莖用誘變劑處理。尤其是，這段帶有三片葉子的匍匐莖是從白三葉草上切下來(lái)的，然后用乙醇消毒。接著，用變位酶處理，比如EMS(乙基甲基磺酸酯)、BAP(6-芐氨基腺嘌呤)、IAA(吲哚乙酸)和NAA(α-萘乙酸)，以誘導(dǎo)突變，并在培養(yǎng)基中培養(yǎng)。然后，從培養(yǎng)基中培養(yǎng)的芽選擇具有四片葉子的三葉草，進(jìn)行重復(fù)培養(yǎng)。具有四片葉子的三葉草新品種在培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根。生根的三葉草轉(zhuǎn)移到花盆中，從盆中選擇合適的莖。然后，再培養(yǎng)選擇的組織繁殖到5代。最后，對(duì)比改進(jìn)的具有四片葉子的三葉草新品種與野生型的三葉草的屬性，確定三葉草新品種的屬性的一致性。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第二個(gè)目的，提供了一種繁殖具有四片葉子的三葉草新品種的方法，其中三葉草是無(wú)性繁殖的。本發(fā)明的繁殖具有四片葉子的三葉草新品種的方法包括以下步驟(a)三葉草消毒，(b)依次用化學(xué)試劑處理三葉草，以誘導(dǎo)三葉草莖的突變以及細(xì)胞分裂，(c)誘導(dǎo)突變的三葉草莖生根，(d)通過(guò)無(wú)性繁殖的方式繁殖三葉草新品種，(e)對(duì)比三葉草新品種與野生型三葉草的屬性，和(f)確定三葉草新品種的屬性的一致性。
在步驟(a)中，從野生型的具有三片葉子的白三葉草上切下一條帶有葉子的匍匐莖，除去所有的葉子。然后，將帶有生長(zhǎng)點(diǎn)的匍匐莖切成約3cm長(zhǎng)，依次用乙醇消毒。用蒸餾水沖洗消毒以后的匍匐莖。最后，用濃度為1.0％的NaOCl溶液處理莖段15分鐘進(jìn)行消毒，然后用無(wú)菌水沖洗3遍。
在步驟(b)中，用乙基甲基磺酸酯處理從步驟(a)得到的莖段以誘導(dǎo)白三葉草芽的突變和細(xì)胞分裂，它還在MS基本培養(yǎng)基中依次用6-芐氨基腺嘌呤、吲哚乙酸、α-萘乙酸處理。
在步驟(c)中，從培養(yǎng)的白三葉草莖段中選擇具有四片葉子的三葉草莖，在培養(yǎng)基中使其生根。
在步驟(d)中，生根的莖被轉(zhuǎn)移到花盆中，使具有四片葉子的三葉草生長(zhǎng)。然后，從盆中選擇具有四片葉子的三葉草莖，以培養(yǎng)5代莖組織，由此通過(guò)無(wú)性繁殖的方式得到具有四片葉子的三葉草新品種，它被稱作“幸運(yùn)草”。
在步驟(e)中，調(diào)查被稱作“幸運(yùn)草”的三葉草新品種的屬性，并與野生型的三葉草進(jìn)行對(duì)比。
在步驟(f)中，將改進(jìn)的具有四片葉子的三葉草的莖或根分成幾段進(jìn)行移植。最后，確定三葉草新品種的屬性的一致性。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種繁殖具有四片葉子的三葉草新品種的方法。
繁殖具有四片葉子的三葉草新品種的方法包括以下步驟(a)三葉草消毒，(b)依次用化學(xué)試劑處理三葉草，以誘導(dǎo)三葉草莖的突變以及細(xì)胞分裂，(c)誘導(dǎo)突變的三葉草生根，(d)通過(guò)無(wú)性繁殖的方式繁殖三葉草新品種，(e)對(duì)比三葉草新品種與野生型三葉草的屬性，和(f)確定三葉草新品種新品種屬性的一致性。
在步驟(a)中，從野生型的具有三片葉子的白三葉草上切下一條帶有葉子的匍匐莖，除去所有的葉子。然后，將帶有生長(zhǎng)點(diǎn)的匍匐莖切成約3cm的長(zhǎng)度，然后依次用乙醇消毒。最后，用蒸餾水沖洗消毒以后的匍匐莖。
在步驟(b)中，用乙基甲基磺酸酯處理從步驟(a)得到的莖段以誘導(dǎo)白三葉草芽的突變和細(xì)胞分裂，它還在MS基本培養(yǎng)基中依次用6-芐氨基腺嘌呤、吲哚乙酸、α-萘乙酸處理。
在步驟(c)中，從培養(yǎng)的白三葉草芽莖段中選擇具有四片葉子的三葉草莖，在培養(yǎng)基中使其生根。
在步驟(d)中，生根的莖被轉(zhuǎn)移到花盆中，使具有四片葉子的三葉草生長(zhǎng)。然后，從盆中選擇具有四片葉子的三葉草莖，以培養(yǎng)5代莖組織，由此通過(guò)無(wú)性繁殖的方式得到具有四片葉子的三葉草新品種，它被稱作“幸運(yùn)草”。
在步驟(e)中，調(diào)查三葉草新品種的屬性，并與野生型的三葉草進(jìn)行對(duì)比。
在步驟(f)中，將改進(jìn)的具有四片葉子的三葉草的莖或根分成幾段進(jìn)行移植。最后，確定三葉草新品種的屬性的一致性。
優(yōu)選地，帶有三片葉子的莖被切成7cm的長(zhǎng)度。除去所有的葉子，然后將帶有生長(zhǎng)點(diǎn)的匍匐莖切成約3～4cm的長(zhǎng)度。然后，將莖段轉(zhuǎn)移到裝有70％乙醇溶液的三角瓶中浸泡30秒鐘進(jìn)行消毒，以無(wú)菌水沖洗3次。然后，在超凈臺(tái)將莖段切成2～3mm長(zhǎng)，其中每一段都帶有一個(gè)生長(zhǎng)點(diǎn)。
在超凈臺(tái)中，將切開(kāi)的莖段轉(zhuǎn)移到0.1～0.3μg/L的乙基甲基磺酸酯溶液中浸泡3秒鐘，以誘導(dǎo)突變和細(xì)胞分裂。接著，用無(wú)菌水沖洗切開(kāi)的莖段。然后，將切開(kāi)的莖段轉(zhuǎn)移到含有MS基本培養(yǎng)基、0.5～2.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、0.5mg/L的吲哚乙酸、0.5mg/L的α-萘乙酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，產(chǎn)生具有四片葉子的三葉草個(gè)體。重復(fù)上述步驟，生產(chǎn)具有四片葉子的三葉草芽，參見(jiàn)


圖1。
生芽的莖段在培養(yǎng)基中培養(yǎng)以得到具有四片葉子的三葉草。然后，從三葉草莖中選擇合適的莖，在含有MS基本培養(yǎng)基、0.5～5.0mg/L的吲哚乙酸、0.5～5.0mg/L的α-萘乙酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。結(jié)果，形成了具有四片葉子的三葉草的芽和莖，同時(shí)也生出了直立生長(zhǎng)的根。
生根的三葉草轉(zhuǎn)移到溫室土壤中，它含有比例為1∶1∶1的珍珠巖、泥煤苔和無(wú)菌沙，其濕度為90％，溫度為18～20℃，光強(qiáng)度為70％。結(jié)果，90％的芽正常生長(zhǎng)。從按照上述方式得到的具有四片葉子的三葉草選擇一條莖，重復(fù)培養(yǎng)5代。然后，得到的三葉草稱作“幸運(yùn)草”。
調(diào)查“幸運(yùn)草”的特征。當(dāng)將這些特征與野生型的三葉草進(jìn)行對(duì)比時(shí)，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的三葉草比野生型的三葉草長(zhǎng)5～10cm，因?yàn)楸景l(fā)明的三葉草具有節(jié)點(diǎn)，并且脫離地表面生長(zhǎng)，而野生型的則是匍匐生長(zhǎng)。
圖2A和2B顯示了根據(jù)本發(fā)明得到的具有三葉草新品種，其中三葉草的芽分別裝在培養(yǎng)皿和花盆中。
三葉草新品種分別具有四片心狀的葉子，其葉片長(zhǎng)度比野生型的三葉草短，寬度亦然。而且，野生型的三葉草具有深綠色的葉子，而本發(fā)明的三葉草則具有淺綠色的葉子。同時(shí)，圖4顯示了根據(jù)本發(fā)明得到的三葉草，其中的葉子具有心的形狀。
這四片葉子從同一莖上長(zhǎng)出，三個(gè)白花形成一個(gè)總狀花序。野生型三葉草一般可以種植2或3年，而稱作“幸運(yùn)草”的三葉草則可以每年種植。
本發(fā)明的三葉草具有很強(qiáng)的生命力和優(yōu)良的生長(zhǎng)潛力。該三葉草甚至可以在強(qiáng)光下種植，并且具有很強(qiáng)的抗寒和抗病能力。而且，本發(fā)明的三葉草可以競(jìng)爭(zhēng)過(guò)野草。由于本發(fā)明的三葉草的根向地下直立生長(zhǎng)且具有較高的生長(zhǎng)速率，它可以相對(duì)容易地在貧瘠的地上生長(zhǎng)，因此該三葉草可以用來(lái)改善土壤的品質(zhì)。另外，本三葉草也可以用作飼養(yǎng)的動(dòng)物的飼料，因?yàn)樵撊~草的產(chǎn)量較高。
如上所述，三葉草新品種被分割成幾條并移植到溫室中。當(dāng)選出具有優(yōu)良屬性(比如葉子的形狀和顏色，覆蓋地面的速度，溫度、濕度、光強(qiáng)度等生長(zhǎng)條件，繁殖方式)的對(duì)象以后，這些程序被不斷地重復(fù)。而且，這些三葉草必須具有優(yōu)良的特性，比如商業(yè)價(jià)值、裝飾價(jià)值、適應(yīng)環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)條件、抗病能力等。根據(jù)本發(fā)明得到的三葉草新品種“幸運(yùn)草”，是通過(guò)選擇具有上述特性的三葉草來(lái)得到的。最后，確定它的特性、一致性和穩(wěn)定性。
下面將詳細(xì)描述根據(jù)本發(fā)明無(wú)性繁殖三葉草的方法，但是，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該清楚地認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明的范圍并不僅僅限于下述的實(shí)施例1繁殖三葉草新品種“幸運(yùn)草”收獲200株韓國(guó)野生型白三葉草，其中的每一株都有三片葉子，莖長(zhǎng)度約7cm。
除去所有的葉子。然后，將三葉草的莖切成3～4cm長(zhǎng)，將莖段轉(zhuǎn)移到裝有70％乙醇溶液的三角瓶中浸泡30秒鐘進(jìn)行消毒，然后以無(wú)菌水沖洗。然后再轉(zhuǎn)入70％乙醇溶液中浸泡15min對(duì)莖段的表面進(jìn)行消毒，然后以無(wú)菌水沖洗3次。
在超凈臺(tái)將莖段再切成2～3mm長(zhǎng)，其中每一段都帶有一個(gè)生長(zhǎng)點(diǎn)。將切開(kāi)的白三葉草莖段用乙基甲基磺酸酯溶液處理以誘導(dǎo)突變。結(jié)果如表1所示。
根據(jù)表1，芽分別用0.1～0.3μg/L的乙基甲基磺酸酯溶液處理3秒鐘。結(jié)果，當(dāng)用0.2μg/L的乙基甲基磺酸酯溶液處理時(shí)，考慮莖上四片葉子的生長(zhǎng)，芽突變比例最高。
表1 乙基甲基磺酸酯對(duì)芽突變的影響

而且，為了提高白三葉草芽的突變和細(xì)胞分裂，用5℃冷水處理芽20秒鐘，然后轉(zhuǎn)移到0.2μg/L的乙基甲基磺酸酯溶液中3秒鐘。然后，用無(wú)菌水沖洗芽。接著，將芽在含有MS基本培養(yǎng)基、1.5mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、0.5mg/L的吲哚乙酸、0.5mg/L的α-萘乙酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。不同誘變劑對(duì)芽繁殖的影響見(jiàn)表2。芽的培養(yǎng)條件是溫度21℃，光強(qiáng)度500lux。表2 6-芐氨基腺嘌呤、吲哚乙酸、α-萘乙酸的混合物對(duì)三葉草芽繁殖的影響

同時(shí)，在培養(yǎng)芽時(shí)向培養(yǎng)基中加入10～30g/L的蔗糖，以降低愈傷組織的形成和透明率。蔗糖濃度對(duì)芽生長(zhǎng)的影響如表3所示。表3 培養(yǎng)基中蔗糖濃度對(duì)三葉草芽繁殖和生長(zhǎng)的影響

用一個(gè)培養(yǎng)罐(對(duì)照例)和一個(gè)密理博罐來(lái)降低培養(yǎng)基中芽的透明率，為了使空氣能夠穿過(guò)密理博段，在其上面附上兩倍的密理博段(3M)。然后，調(diào)查培養(yǎng)罐中的透氣性對(duì)愈傷形成和芽透明率的影響。結(jié)果如表4所示。表4 培養(yǎng)罐中的透氣性對(duì)愈傷形成和芽透明率的影響

另外，將芽在含有MS基本培養(yǎng)基、0.5～5.0mg/L的吲哚乙酸、0.5～5.0mg/L的α-萘乙酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。調(diào)查培養(yǎng)基對(duì)培養(yǎng)的芽的生長(zhǎng)的影響。培養(yǎng)條件是pH5.5，22～25℃，光強(qiáng)度800lux。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表5所示。表5 IAA和NAA對(duì)三葉草芽生長(zhǎng)的影響


根據(jù)本發(fā)明的調(diào)查，芽的培養(yǎng)效率隨著B(niǎo)AP濃度的增加而提高。在含有1.0～2.0mg/L的BAP的培養(yǎng)基中，芽的平均數(shù)量不少于2.7。但是，從芽根部產(chǎn)生的愈傷組織抑制了芽的生長(zhǎng)。因此，透明率高于42.3％，如表2所示。
而且，向培養(yǎng)基中加糖以減少愈傷組織的形成。結(jié)果，觀察到僅在加有15～20g/L蔗糖的培養(yǎng)基中產(chǎn)生愈傷組織，如表3所示。
而且，將芽在密理博罐中培養(yǎng)以降低芽的透明率。結(jié)果，根本就沒(méi)有觀察到透明的芽，如表4所示。
在含有0.5mg/L的IBA或0.5～1.0mg/L的NAA的MS基本培養(yǎng)基中，可以較好地誘導(dǎo)芽生根，如表5所示。
實(shí)施例2三葉草新品種的無(wú)性繁殖一旦根據(jù)本發(fā)明的上述方法在培養(yǎng)基中得到三葉草的根和芽，將根移到溫室中，其環(huán)境為濕度90％，溫度18～20℃，光強(qiáng)度70％，其土壤中含有比例為1∶1∶1的珍珠巖、泥煤苔和無(wú)菌沙。然后，在每天上午的9～10點(diǎn)和下午4～5點(diǎn)給根澆水(約18℃)。結(jié)果，90％的根正常生長(zhǎng)。根據(jù)上述的方法得到具有四片葉子的三葉草莖，通過(guò)5代組織培養(yǎng)進(jìn)行無(wú)性繁殖。
對(duì)比組織培養(yǎng)的方法和切割繁殖的方法的結(jié)果如表6所示。在無(wú)性繁殖中，可以得到許多具有四片葉子的三葉草。在這些具有四片葉子的三葉草中，選擇具有優(yōu)良特性(比如葉子的形狀和顏色，覆蓋地面速度，溫度、濕度、光強(qiáng)度等生長(zhǎng)條件，繁殖方式)的那些。而且，根據(jù)它們的商業(yè)和裝飾價(jià)值、適應(yīng)環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)條件、抗病能力等來(lái)選擇。然后，確定它的一致性。得到的三葉草新品種稱作“幸運(yùn)草”。表6 組織培養(yǎng)和切割法的對(duì)比

實(shí)施例3調(diào)查本發(fā)明的三葉草新品種的特性調(diào)查根據(jù)本發(fā)明得到的三葉草新品種的特性，并與只有三片葉子的野生型三葉草進(jìn)行對(duì)比。對(duì)比結(jié)果如表7所示。表7 本發(fā)明的三葉草新品種與野生型三葉草的特性對(duì)比


如表7所示，本發(fā)明的三葉草有四片葉子。每一片葉子都是寬的心狀，并且比野生型三葉草葉片更短。本發(fā)明的三葉草比野生型約長(zhǎng)5～10cm，因?yàn)楸景l(fā)明的三葉草的莖脫離地面生長(zhǎng)，這與野生型匍匐生長(zhǎng)不同。而且，本發(fā)明的三葉草的顏色是淺綠色，而野生型三葉草則是深綠色。
本發(fā)明的三葉草的葉和莖如圖4所示。根據(jù)圖4，從該三葉草的一個(gè)節(jié)點(diǎn)上長(zhǎng)出4片葉子，其花是有3個(gè)花托的總狀花序。根據(jù)本發(fā)明得到的三葉草，“幸運(yùn)草”，是一年生植物，而野生型三葉草則是終年生植物。
本發(fā)明的三葉草新品種具有很強(qiáng)的生命力、優(yōu)良的抗冷能力和抗病能力。該三葉草可以在強(qiáng)光下生長(zhǎng)。而且，由于本發(fā)明的三葉草的根向地下直立生長(zhǎng)且具有較高的生長(zhǎng)速率，它可以相對(duì)容易地在貧瘠的地上生長(zhǎng)。另外，本三葉草的產(chǎn)量較高。所以，該三葉草可以用作飼養(yǎng)的動(dòng)物的飼料和改善土壤的品質(zhì)。
實(shí)施例4植物組織培養(yǎng)和切割法繁殖的“幸運(yùn)草”的對(duì)比本研究對(duì)比了不同的無(wú)性繁殖方法。本發(fā)明的切割無(wú)性繁殖方法需要相對(duì)較多的耕地和較多的時(shí)間。而且，種子冬眠和有限的種子數(shù)量是該繁殖方法的限制因素。相反，三葉草的組織培養(yǎng)方法則可以終年得到無(wú)病毒的植株和快速繁殖，因而可以節(jié)省大量的時(shí)間和耕地。
組織培養(yǎng)的無(wú)性繁殖和有生命力的繁殖，比如切割法和壓條法，可以產(chǎn)生與母本相同形狀的具有四片葉子的三葉草。而且，由于建立了三葉草的繁殖方法，象播種等有性繁殖方法也成為可能。
如上所述，首先從具有三片葉子的野生型三葉草上選擇葉子和莖，然后用乙基甲基磺酸酯、6-芐氨基腺嘌呤、吲哚乙酸和α-萘乙酸以誘導(dǎo)突變。利用選擇的發(fā)生突變的莖進(jìn)行重復(fù)組織培養(yǎng)。所以，得到具有四片葉子的三葉草，其中的三葉草具有較強(qiáng)的生命力、很強(qiáng)的抗寒能力、很強(qiáng)的抗病能力、很高的商業(yè)和裝飾價(jià)值。而且，本發(fā)明的三葉草具有較高的生長(zhǎng)速率，可以競(jìng)爭(zhēng)過(guò)野草。所以，本發(fā)明的三葉草可以用于園藝工業(yè)、構(gòu)建草原、改善土壤品質(zhì)、給飼養(yǎng)動(dòng)物提供飼料。
由于本發(fā)明通過(guò)參考具體的實(shí)施例進(jìn)行了分析和描述，本領(lǐng)域的技術(shù)人員不難理解，在形式和細(xì)節(jié)上的改變不脫離本發(fā)明的從屬權(quán)利要求所定義的精神和范圍。
權(quán)利要求
1.一種繁殖具有四片葉子的三葉草新品種的方法，它包括以下步驟(A)提供帶有葉子的野生型三葉草的莖段，它包括以下子步驟(a)將帶葉的野生型三葉草莖切成長(zhǎng)約5cm的莖段；(b)除去莖上所有的葉子，然后將帶有生長(zhǎng)點(diǎn)的莖切成3～4cm長(zhǎng)的莖段；(c)將莖段轉(zhuǎn)入三角瓶中，用濃度為70％的乙醇溶液處理20～30秒對(duì)莖段進(jìn)行消毒，然后用無(wú)菌水沖洗3遍；(d)用濃度為1.0％的NaOCl溶液處理莖段15分鐘進(jìn)行消毒，然后用無(wú)菌水沖洗3遍；(B)在超凈臺(tái)中將步驟(A)得到的無(wú)菌莖段切成2～3mm長(zhǎng)，其中的每一個(gè)莖段都有一個(gè)生長(zhǎng)點(diǎn)，以允許芽從莖段上長(zhǎng)出；(C)將步驟(B)的莖段在以下條件培養(yǎng)溫度20～22℃，光強(qiáng)度500lux，培養(yǎng)基含有MS基本培養(yǎng)基、0.5～2.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、0.5mg/L的吲哚乙酸、0.5mg/L的α-萘乙酸，用5℃的水處理芽20秒鐘，然后用濃度為0.1～0.3μg/L的乙基甲基磺酸酯溶液處理，再用無(wú)菌水沖洗；和(D)對(duì)(C)培養(yǎng)得到的具有四片葉子的三葉草進(jìn)行無(wú)性繁殖，它包括以下子步驟(a)當(dāng)芽和根在組織培養(yǎng)和誘導(dǎo)根的培養(yǎng)基中長(zhǎng)出時(shí)，將芽轉(zhuǎn)移到溫室土壤中，它含有比例為1∶1∶1的珍珠巖、泥煤苔和無(wú)菌沙，其濕度為90％，溫度為18～20℃，光強(qiáng)度為70％；(b)從在土壤中生長(zhǎng)的5代選擇具有四片葉子的三葉草重復(fù)進(jìn)行組織培養(yǎng)的無(wú)性繁殖；和(c)對(duì)三葉草進(jìn)行切分/移植或切割以得到新品種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的繁殖具有四片葉子的三葉草新品種的方法，在其中的步驟(C)的根培養(yǎng)中，6-芐氨基腺嘌呤的濃度是1.0～2.0mg/L，蔗糖的濃度是15～20g/L，以降低愈傷的形成和透明率。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2建立的具有四片葉子的三葉草新品種，其中的新品種與野生型三葉草相比具有以下特征
全文摘要
本發(fā)明提供了一種稱作“幸運(yùn)草”的具有四片葉子的三葉草新品種及其大規(guī)模繁殖的方法。繁殖該三葉草新品種的方法包括以下步驟(a)三葉草消毒，(b)依次用化學(xué)試劑處理三葉草，以誘導(dǎo)三葉草莖的突變以及細(xì)胞分裂，(c)誘導(dǎo)突變的三葉草生根，(d)通過(guò)無(wú)性繁殖的方式繁殖三葉草新品種，(e)對(duì)比三葉草新品種與野生型三葉草的屬性，和(f)確定三葉草新品種的屬性的一致性。本發(fā)明的三葉草新品種具有很強(qiáng)的生命力、優(yōu)良的抗冷能力和抗病能力。而且，它生長(zhǎng)速度快，可以在強(qiáng)光下生長(zhǎng)，還可以競(jìng)爭(zhēng)過(guò)野草。該三葉草不但可以用作飼養(yǎng)，還可以用來(lái)改善土壤的品質(zhì)。所以，該三葉草新品種具有很高的商業(yè)和裝飾價(jià)值。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1440644SQ0310495
公開(kāi)日2003年9月10日 申請(qǐng)日期2003年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月28日
發(fā)明者李元慶 申請(qǐng)人:李元慶