專利名稱：新幾內(nèi)亞鳳仙的快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新幾內(nèi)亞鳳仙的快速繁殖方法，具體的講，是指采用組織培養(yǎng)技術(shù)對新幾內(nèi)亞鳳仙進行快速繁殖的方法。
廣義來說，組織培養(yǎng)不僅包括無菌條件下利用人工培養(yǎng)基對植物組織的培養(yǎng)，而且包括對原生質(zhì)體、懸浮細(xì)胞和植物器官的培養(yǎng)。很早以來，專家們根據(jù)植物材料的不同，把組織培養(yǎng)分為五種類型，即1.愈傷組織培養(yǎng)；2.懸浮細(xì)胞培養(yǎng)；3.器官培養(yǎng)(胚、花藥、子房、根和莖的培養(yǎng)等)；4.莖尖分生組織培養(yǎng)；5.原生質(zhì)體培養(yǎng)。其中愈傷組織培養(yǎng)是一種最常見的培養(yǎng)形式。
新幾內(nèi)亞鳳仙(英文名Guinea Impriens)原產(chǎn)非洲南部，馴化品種株形緊密，矮生，花朵直徑大。為多年生草本花卉，枝葉質(zhì)地較硬，葉片對生，葉表有光澤，葉脈清晰，葉片有綠色、深綠色和古銅色，花朵左右對稱，花瓣五片，不等大?；ㄉr艷，花色品種多，包括橙紅色、紅色、猩紅色、粉色、紫紅色、白色等十八種花色。新幾內(nèi)亞鳳仙性喜疏松及透氣性良好的土壤，花期長(可達四個半月)。適合盆栽、地栽、家適擺設(shè)及園林布置。
新幾內(nèi)亞鳳仙可以通過種子得到幼苗，其優(yōu)點是根系比較發(fā)達，后期生長快，但育苗期較長(從播種到開花約15周)，播種時易受土壤條件、氣候條件、溫濕度等的影響，往往發(fā)芽率較低，而且種子較貴，成本高。另外，目前人們還采用扦插方式來進行幾內(nèi)亞鳳仙的繁殖，其優(yōu)點是開花早，生長周期較短(從扦插到開花約12周)。但扦插時生根率較低，而且需材量大，成本高，花期難以整齊一致。因此，以上兩種方法都不利于新幾內(nèi)亞鳳仙的快速與大量繁殖。組織培養(yǎng)作為一種新的繁殖方式，目前已經(jīng)成為許多植物快速繁殖的首選方案，但目前還沒有關(guān)于新幾內(nèi)亞鳳仙組織培養(yǎng)方面的報道。
本發(fā)明的目的在于針對目前新幾內(nèi)亞鳳仙培養(yǎng)方法的不足，提供一種采用組織培養(yǎng)技術(shù)對新幾內(nèi)亞鳳仙進行快速繁殖的方法，該方法具有取材少、繁殖率高、成本低、成苗整齊一致、遺傳穩(wěn)定性好等特點，可以進行大規(guī)模的工廠化生產(chǎn)。
本發(fā)明的方法依次包括如下步驟(1)選擇外植體進行滅菌處理；(2)經(jīng)滅菌的外植體通過誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織；(3)愈傷組織經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生叢生芽并進行增殖；(4)將叢生芽培養(yǎng)為成苗并進行移栽管理。
本發(fā)明的較佳方案是步驟(1)到(4)中的某一個步驟采用下列方案，其它步驟采用本領(lǐng)域的通用方法(1)外植體的選擇與滅菌選用新幾內(nèi)亞鳳仙嫩葉或莖尖用8％-10％新潔爾滅浸泡5-10分鐘(用min表示，下同)，清水洗凈后，用70％酒精浸25-35min，之后用8％-10％的NaClO殺菌10-15min，然后用0.2％-0.3％升汞殺菌5-10min，最后用無菌水沖洗3次。
(2)愈傷組織的誘導(dǎo)采用MS培養(yǎng)基，激素濃度為BA 1-3mg/L、NAA 0-1mg/L，溫度為25-28℃，外植體遮光5～7天(用d表示，下同)后再進行光照，光照強度2000-2500勒克斯(用lx表示，下同)，再培養(yǎng)8-15d后可產(chǎn)生愈傷組織。
(3)叢生芽的產(chǎn)生及增殖采用1/2MS培養(yǎng)基，激素采用IAA 0-1mg/L，BA 1-2mg/L。培養(yǎng)溫度為25-28℃，光照強度為2500-3000lx，培養(yǎng)時間為15-20d。
(4)成苗培養(yǎng)及移栽管理將叢生芽接種到1/2MS+IBA 0.1-0.4mg/L的培養(yǎng)基上，10-16d可生根并形成完整植株，接著讓其適應(yīng)環(huán)境后移栽于用塑料薄膜遮蓋的環(huán)境中進行生長。
本發(fā)明的更優(yōu)方案是步驟(1)到(4)均采用上述的方案。
本發(fā)明的最佳方案是步驟(2)中BA的濃度為2mg/L，NAA的濃度為0.3mg/L；步驟(3)中IAA的濃度為0.2mg/L，BA的濃度為1.0mg/L；步驟(4)中IBA濃度為0.2mg/L。
在步驟(4)中，所用培養(yǎng)基中加入2g/L的活性炭能提高成苗培養(yǎng)的效果，移栽時要用塑料薄膜遮蓋6-7d，保持環(huán)境濕度80％以上，移栽后10～15d開始施肥，每周一次，用0.2％KH2PO4葉面噴施。
在上述配方中，MS培養(yǎng)基是最常用的培養(yǎng)基，一般從有關(guān)植物組織培養(yǎng)的書都可找到其配方。BA代表6-芐基氨基嘌呤，NAA為萘乙酸，IAA為吲哚乙酸，IBA為吲哚丁酸，它們都是組織培養(yǎng)方面常用的藥物，可以通過購買得到。
本發(fā)明方法具有如下優(yōu)點及效果1.取材少，繁殖率高，成苗整齊，花期易達到一致。
2.可以避開夏天高溫對幼苗生長的不適應(yīng)，新幾內(nèi)亞鳳仙只要不遇嚴(yán)寒或因氣溫較高引起生長不良，可以持續(xù)盛花。
3.采用0.5-0.7mm莖尖建外植體，既能防止病毒的傳播，又保證了遺傳的穩(wěn)定性。
4.繁殖速度快，可以進行大規(guī)模的工廠化生產(chǎn)。
下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明進行進一步說明實施例1(1)外植體的選擇與滅菌選用新幾內(nèi)亞鳳仙嫩葉，用清水沖洗干凈，用8％新潔爾滅浸泡5min，清水洗凈后，用70％酒精浸25min，之后用8％的NaClO殺菌10min，然后用0.2％升汞殺菌5min，最后用無菌水沖洗3次。
(2)愈傷組織的誘導(dǎo)采用MS培養(yǎng)基，激素濃度為BA 1.5mg/L、NAA 1.0mg/L，溫度為25-28℃，外植體遮光5d后再進行光照，光照強度2500lx，再培養(yǎng)8d后產(chǎn)生愈傷組織。
(3)叢生芽的產(chǎn)生及增殖采用1/2MS培養(yǎng)基，激素濃度為IAA0.3mg/L，BA 1.0mg/l。培養(yǎng)溫度為25-28℃，光照強度為2500lx，培養(yǎng)時間為15天。
(4)成苗培養(yǎng)及移栽管理將叢生芽接種到1/2MS+IBA 0.2mg/L的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)14d可生根并形成完整植株，適應(yīng)環(huán)境后進行移栽，移栽時用塑料薄膜遮蓋7d，保持環(huán)境濕度80％以上。移栽后10d開始施肥，每周一次，用0.2％KH2PO4葉面噴施，成活率可達95％以上。
實施例2操作同實施例1，在步驟(1)中，外植體選用新幾內(nèi)亞鳳仙的莖尖，用10％新潔爾滅浸泡，時間為10min，70％酒精浸泡時間為35min，用10％的NaClO殺菌15min，用0.3％升汞殺菌10min。步驟(2)中，采用的激素為BA 3mg/L、NAA 0.5mg/L，外植體遮光7后再進行光照，光照強度2000lx，再培養(yǎng)15d后產(chǎn)生愈傷組織。步驟(3)中采用1mg/L的IAA和2mg/L的BA，光照強度為3000lx。步驟(4)中采用0.4mg/L的IBA，培養(yǎng)10d形成完整植株，移栽時用塑料薄膜遮蓋6d。移栽后15d開始施肥，結(jié)果得到發(fā)育良好的幼苗。
實施例3其它同實施例1，步驟(2)中，采用2mg/L的BA和0.3mg/L NAA，光照后培養(yǎng)的時間為12d；步驟(3)中采用0.2mg/L的IAA和1.0mg/L的BA，培養(yǎng)時間增加到20d；步驟(4)中采用0.1mg/L的IBA，培養(yǎng)10d形成完整植株，經(jīng)發(fā)育成的幼苗長勢良好。
實施例4其它操作同實施例1，步驟(2)中只加入1.0mg/L的BA，不加入NAA，愈傷組織的誘導(dǎo)不受影響；步驟(3)中，采用BA1.5mg/L+IAA0.3mg/L的激素，在轉(zhuǎn)入的89個材料中，叢生芽誘導(dǎo)率為33％。
實施例5其它同實施例1，步驟(3)中，采用1/2MS+BA1.0mg/L的培養(yǎng)基，20d后，叢生芽數(shù)量可增加19倍，明顯提高繁殖率。
實施例6其它同實施例1，步驟(4)中，培養(yǎng)基中加入活性炭2g/L，激素濃度為IBA0.4mg/L，培養(yǎng)16d形成完整植株，幼苗生長健壯，根粗而長。
實施例7其它同實施例1，步驟(3)中不加入IAA，叢生芽誘導(dǎo)率沒有受到明顯的影響。
根據(jù)對實施例1到7的統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)從外植體的建立到煉苗完成，具體比率(平均數(shù))如下接種外植體數(shù)量100個，滅菌后未污染數(shù)為77.8個，經(jīng)培養(yǎng)叢生芽產(chǎn)生數(shù)為25.67個，增殖一代為487.73個，二代為9266.87個，三代為76070.53個。
權(quán)利要求
1.一種新幾內(nèi)亞鳳仙的快速繁殖方法，其特征在于包括如下步驟(1)選擇外植體進行滅菌處理；(2)經(jīng)滅菌的外植體經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織；(3)愈傷組織經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生叢生芽并進行增殖；(4)將叢生芽培養(yǎng)為成苗并進行移栽管理。
2.如權(quán)利要求1所述的繁殖方法，其特征在于在步驟(1)中，選用新幾內(nèi)亞鳳仙嫩葉或莖尖用8％-10％新潔爾滅浸泡5-10min，清水洗凈后，用70％酒精浸25-35min，之后用8％-10％的NaClO殺菌10-15min，然后用0.2％-0.3％升汞殺菌5-10min，最后用無菌水沖洗3次。
3.如權(quán)利要求1所述的繁殖方法，其特征在于在步驟(2)中，采用MS培養(yǎng)基，激素濃度為BA 1-3mg/L、NAA 0-1mg/L，溫度為25-28℃，外植體遮光5～7d后再進行光照，光照強度2000-2500lx，再培養(yǎng)8-15d后可產(chǎn)生愈傷組織。
4.如權(quán)利要求1所述的繁殖方法，其特征在于在步驟(3)中采用1/2MS培養(yǎng)基，激素采用IAA 0-1mg/L、BA 1-2mg/L，培養(yǎng)溫度為25-28℃，光照強度為2500-3000lx，培養(yǎng)時間為15-20d。
5.如權(quán)利要求1所述的繁殖方法，其特征在于在步驟(4)中，將叢生芽接種到1/2MS+IBA 0.1-0.4mg/L的培養(yǎng)基上，10-16d可生根并形成完整植株，接著讓其適應(yīng)環(huán)境后移栽于用塑料薄膜遮蓋的環(huán)境中進行生長。
6.如權(quán)利要求1所述的繁殖方法，其特征在于在步驟(1)中，選用新幾內(nèi)亞鳳仙嫩葉或莖尖用8％-10％新潔爾滅浸泡5-10min，清水洗凈后，用70％酒精浸25-35min，之后用8％-10％的NaClO殺菌10-15min，然后用0.2％-0.3％升汞殺菌5-10min，最后用無菌水沖洗3次；在步驟(2)中，采用MS培養(yǎng)基，激素濃度為BA 1-3mg/L、NAA 0-1mg/L，溫度為25-28℃，外植體遮光5～7d后再進行光照，光照強度2000-2500lx，再培養(yǎng)8-15d后可產(chǎn)生愈傷組織；在步驟(3)中，采用1/2MS培養(yǎng)基，激素采用IAA 0-1mg/L、BA 1-2mg/L，培養(yǎng)溫度為25-28℃，光照強度為2500-3000lx，培養(yǎng)時間為15-20d；在步驟(4)中，將叢生芽接種到1/2MS+IBA 0.1-0.4mg/L的培養(yǎng)基上，10-16d可生根并形成完整植株，接著讓其適應(yīng)環(huán)境后移栽于用塑料薄膜遮蓋的環(huán)境中進行生長。
7.如權(quán)利要求6所述的繁殖方法，其特征在于步驟(2)中BA的濃度為2mg/L，NAA的濃度為0.3mg/L；步驟(3)中IAA的濃度為0.2mg/L，BA的濃度為1.0mg/L；步驟(4)中IBA的濃度為0.2mg/L。
8.如權(quán)利要求1所述的繁殖方法，其特征在于在步驟(4)培養(yǎng)基中加入2g/L的活性炭；移栽時用塑料薄膜遮蓋6-7d，保持環(huán)境濕度80％以上，移栽后10～15d開始施肥，每周一次，用0.2％KH2PO4葉面噴施。
全文摘要
一種新幾內(nèi)亞鳳仙的快速繁殖方法,包括外植體的選擇與滅菌、愈傷組織的誘導(dǎo)、叢生芽的產(chǎn)生及增殖、成苗培養(yǎng)及移栽管理四個步驟。該方法具有取材少、繁殖率高、成本低、成苗整齊一致、遺傳穩(wěn)定性好等特點,可以進行大規(guī)模的工廠化生產(chǎn)。
文檔編號A01H4/00GK1379973SQ0211531
公開日2002年11月20日 申請日期2002年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月31日
發(fā)明者彭永宏, 李進進 申請人:華南師范大學(xué)