用于治療乙肝的脂肪間充質(zhì)祖細胞的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及脂肪干細胞應(yīng)用領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供了一種脂肪干細胞用于治 療己肝的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝病分為病毒性肝病和非病毒性肝炎。病毒性肝炎主要包括甲、己、丙、了、戊型病 毒性肝炎，非病毒性肝病主要包括酒精性肝病、藥物或毒物性肝病、新陳代謝異常性肝病、 脂肪性肝病。慢性己型肝炎呈全球分布，可能導(dǎo)致包括肝功能失代償、肝硬化W及肝細胞癌 等疾病。活動性己肝病毒（皿V)復(fù)制是肝損傷和疾病進展的主要驅(qū)動因素。
[0003] 重型己型肝炎是感染皿V后導(dǎo)致的重型肝炎，其發(fā)病兇險，進展迅速，絕大部分患 者預(yù)后不良，可迅速出現(xiàn)大面積肝細胞壞死導(dǎo)致肝功能嚴重受損，肝臟代謝、排泄和解讀的 功能減退。從而導(dǎo)致機體免疫能力下降，造成惡性循環(huán)。目前臨床上缺乏有效的治療手段， 主要是血漿置換和肝移植，但由于供體缺乏，很多患者在等待移植供體期間死亡。因此，及 時有效的肝功能支持和促進肝細胞再生可能幫助肝功能衰竭患者無需肝移植而自行恢復(fù) 或者度過等待移植的難關(guān)。
[0004] 傳統(tǒng)藥物a干擾素能夠有效地抑制病毒復(fù)制，療效相對持久，但其適用的人群范 圍窄，不良反應(yīng)發(fā)生率較高。而新一代的干擾素-聚己醇化干擾素，它的療效略優(yōu)于普通干 擾素，但其仍然具有使用患者群窄，不良反應(yīng)發(fā)生率較高，價格較貴的缺點。拉夫米定是第 一個核巧類似物，能夠快速、持久抑制病毒復(fù)制，改善肝功能，延緩己肝疾病進展的藥物，但 其皿eAg血清轉(zhuǎn)陰率低。文獻報道服用拉米夫定1年皿eAg血清轉(zhuǎn)陰率為16%左右，停藥 后容易復(fù)發(fā)、病毒不能徹底清除隨治療時間延長，病毒耐藥突變的發(fā)生率增高（第1、2、3、 4年分別為14%、38%、49%、66% )。阿德福韋醋長期治療耐藥發(fā)生率低，對拉米夫定耐藥 者仍有效，但其抗病毒作用較弱，起效慢，有潛在的腎毒性。恩替卡韋的抗病毒作用強，耐藥 率低，在動物實驗發(fā)現(xiàn)致癌性，且價格較貴。替比夫定抗病毒作用強，皿eAg轉(zhuǎn)換率高，但其 變異率較高，有肌酸激酶升高等副作用，上市時間短，抗病毒作用，長期療效和安全性都有 待證實。核巧（酸）類似藥物均不能隨便停藥，長期服用己肝病毒輕易發(fā)生變異耐藥，也會 出現(xiàn)像流感樣、厭食、惡必、腹瀉、抑郁、必絞痛等副作用。而且，抗病毒治療只能抑制皿V復(fù) 巧||，不能徹底清除病毒，也無法修復(fù)肝炎導(dǎo)致的肝細胞壞死。
[0005] 目前，己肝的治療主要是抗病毒治療。而現(xiàn)階段的抗病毒藥物只能抑制皿V復(fù)制， 尚不能徹底清除病毒，也無法修復(fù)肝炎導(dǎo)致的肝細胞壞死。因此感染己肝病毒后容易形成 慢性己肝，有可能導(dǎo)致肝硬化、肝癌等發(fā)生。
[0006] 綜上所述，本領(lǐng)域尚缺乏一種能夠有效治療己型肝炎，特別是能夠徹底清除己肝 病毒，修復(fù)肝炎導(dǎo)致的肝細胞壞死的手段。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種能夠有效治療己型肝炎，特別是能夠徹底清除己肝病 毒，修復(fù)肝炎導(dǎo)致的肝細胞壞死的手段。
[0008] 本發(fā)明的第一方面，提供了一種脂肪間充質(zhì)祖細胞的用途，其特征在于，用于制備 治療己肝的藥物組合物。
[0009] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細胞是傳代培養(yǎng)的脂肪間充質(zhì)祖細胞。
[0010] 在另一優(yōu)選例中，在所述組合物中，主要活性成分僅為脂肪間充質(zhì)祖細胞。
[0011] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物中，所述脂肪間充質(zhì)祖細胞的含量為IX l(f/ ml-1 X lOVml。
[0012] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物包括；脂肪間充質(zhì)祖細胞，和藥學(xué)上可接受的 載體。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述的載體是輸液劑載體和/或注射劑載體。
[0014] 在另一優(yōu)選例中，所述的治療包括選自下組的一項或多項指標改善：
[0015] 己肝表面抗原、己肝表面抗體、己肝e抗原、己肝e抗體、己肝核必抗體、己肝病毒 DNA，和 ALT。
[0016] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細胞具有選自下組的任一或多種特征：
[0017] (i)80% W上的細胞具有表面抗原CD29 ;
[0018] (ii)70%W上的細胞具有表面抗原CD73 ;
[0019] (iii)60%W上的細胞具有表面抗原CD105 ;
[0020] (iv)70% W上的細胞具有表面抗原CD90。
[0021] 在另一優(yōu)選例中，90% W上的細胞具有表面抗原CD29。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，80% W上的細胞具有表面抗原CD73。
[0023] 在另一優(yōu)選例中，70% W上的細胞具有表面抗原CD105。
[0024] 在另一優(yōu)選例中，80% W上的細胞具有表面抗原CD90。
[00巧]在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細胞具有選自下組的任一或多種特征：
[002引 （V)在細胞群中，10% W下的細胞具有表面抗原CD34 ;
[0027] (vU在細胞群中，10% W下的細胞具有表面抗原CD45。
[0028] 在另一優(yōu)選例中，5% W下的細胞具有表面抗原CD34。
[0029] 在另一優(yōu)選例中，5% W下的細胞具有表面抗原CD45。
[0030] 在另一優(yōu)選例中，1 % W下的細胞具有表面抗原CD34。
[0031] 在另一優(yōu)選例中，1% W下的細胞具有表面抗原CD45。
[0032] 本發(fā)明的第二方面，提供了一種用于預(yù)防或治療肝炎的藥物組合物，所述的藥物 組合物包括；有效量的脂肪間充質(zhì)祖細胞，W及藥學(xué)上可接受的載體。
[0033] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥學(xué)上可接受的載體包括（但并不限于）：鹽水、緩沖液、 葡萄糖、水、甘油、己醇、及其組合。
[0034] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物為靜脈注射試劑。
[0035] 在另一優(yōu)選例中，所述的靜脈注射試劑中脂肪間充質(zhì)祖細胞的濃度為 0. 1-100 X 1〇4 個 /ml，較佳地為 1-10 X 1〇4 個 /ml，更佳地為 2-5 X 1〇5 個 /ml。
[0036] 在另一優(yōu)選例中，所述的注射試劑的體積為30-70ml。
[0037] 本發(fā)明的第H方面，提供了一種預(yù)防或治療肝炎的方法，包括步驟；給需要的對象 施用脂肪間充質(zhì)祖細胞或脂肪間充質(zhì)祖細胞群、或含有脂肪間充質(zhì)祖細胞或脂肪間充質(zhì)祖 細胞群的藥物組合物。
[0038] 在另一優(yōu)選例中，所述的對象為人或非人哺乳動物。
[0039] 在另一優(yōu)選例中，所述的非人哺乳動物為鼠、兔、牛、羊、豬等。
[0040] 在另一優(yōu)選例中，所述的施用方式為靜脈回輸。
[0041] 應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文（如實施例）中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可W互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說明】
[0042] 圖1脂肪細胞分化的油紅0染色；
[0043] 圖2脂肪細胞分化的油紅0染色對照組（陰性）；
[0044] 圖3成骨細胞分化茜素紅染色檢測；
[0045] 圖4成骨細胞分化茜素紅染色檢測對照組（陰性），未分化的細胞染色為陰性；
[0046] 圖5流式檢測試驗圖譜。
【具體實施方式】
[0047] 本發(fā)明人經(jīng)過長期而深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)，脂肪間充質(zhì)祖細胞具有極其優(yōu)異 的預(yù)防或治療肝炎（尤其是己型肝炎）的作用。具體地，給需要的對象施用本發(fā)明的含有 脂肪間充質(zhì)祖細胞的藥物組合物，對于肝炎有顯著的預(yù)防或治療作用，可W使多種表面抗 原下降，病毒DNA顯著減少，并減低ALT,促進肝功能的修復(fù)。在此基礎(chǔ)上，發(fā)明人完成了本 發(fā)明。
[0048] 術(shù)語
[0049] 如本文所用，術(shù)語"W上"和"W下"包括本數(shù)，例如"95% W上"指> 95%，"0. 2% W下，，指《0. 2%。
[0050] 己型肝炎
[0051] 己型病毒性肝炎，簡稱己肝，是一種由己型肝炎病毒化BV)感染機體后所引起的 疾病。
[0052] 己肝病毒宿主范圍狹窄，且具有明顯的嗜肝性，體外培養(yǎng)難度大。己型肝炎模型涉 及己肝病毒感染及感染后機體免疫反應(yīng)，因此在治療過程中不僅需要修復(fù)肝臟受損細胞， 還需要抑制體內(nèi)病毒復(fù)制及調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，與非病毒性肝炎有較大的區(qū)別。目前，動物模型 主要利用免疫缺陷的動物制成人皿V動物模型。其要求主要是與人臨床肝炎特征相似，病 毒血癥W及血液中免疫學(xué)指標維持一定時間，在最大程度上還原己肝病毒感染人體的疾病 狀態(tài)。而非病毒性肝炎模型，例如酒精性肝病模型、藥物性肝炎模型等直接通過飲食或藥物 進行干預(yù)，損傷動物肝臟細胞功能，模擬人體肝炎的臨床表現(xiàn)。
[005引常見的己肝檢測指標"己肝五項"包括己肝表面抗原、己肝表面抗體、e抗原、e抗 體、核必抗體。表面抗原是己肝病毒的外殼蛋白質(zhì)，自身不具有傳染性，但它的出現(xiàn)常伴隨 著己肝病毒的存在，因此它的陽性為已經(jīng)感染己肝病毒的標志。通常在感染病毒后2-6個 月，血清轉(zhuǎn)氨酶還未上升時，便可在血清中測到陽性。急性己肝患者絕大多數(shù)可W在病程初 期轉(zhuǎn)陰，但慢性己肝患者會持續(xù)陽性。表面抗體是體內(nèi)對己肝病毒免疫和保護性抗體，多在 恢復(fù)期出現(xiàn)陽性。與此同時，接受己肝注射疫苗者，絕大多數(shù)也呈陽性。e抗原通常在己肝 病毒感染后，表面抗原陽性同時，或其后數(shù)天便可測得陽性。e抗體陽性在抗原轉(zhuǎn)陰后數(shù)月 出現(xiàn)。核必抗體一般在表面抗原出現(xiàn)后3