分類：生物化工 點(diǎn)擊量：671
人生有高潮，有低谷。低谷時(shí)，掌握一門投入不需要太多，就可以換碗飯吃的技術(shù)，至少生存無憂。特別是近兩年后疫情時(shí)代，更是顯現(xiàn)出了掌握一門生存技術(shù)的優(yōu)勢(shì)。這些小本創(chuàng)業(yè)技術(shù)資料是歷經(jīng)1年收集而來，贈(zèng)送給支持我們的用戶。
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一.主要設(shè)備:(1)工業(yè)用離心機(jī)一臺(tái);(2)恒溫水浴鍋(10L--50L)(可自制)1臺(tái);(3)冰柜1臺(tái);(4)攪拌機(jī)1臺(tái);(5)玻璃器皿:1000ml,500ml燒杯各3只,50ml燒杯2只,50ml,500ml量杯各1個(gè);(6)塑料桶若干個(gè)。 二.主要試劑:(工業(yè)純度)檸檬酸鈉,檸檬酸,葡萄糖,乙醇90%，氯仿,丙酮,氯化鈉,磷酸氫二鈉,磷酸二氫鈉,去離子水或蒸餾水,葡萄糖凝酸膠SephadexG--100和DEAE--纖維素. 三.試劑的配制: 1.抗凝劑配方:(1)檸檬酸鈉30g,檸檬酸10g葡萄糖25g加水至1升,一般此種是每7ml血液,加1ml(抗凝劑).(2)40g/升檸檬酸鈉溶液:在1升水中加入0.9克的氯化鈉. 2.生理鹽水:(0.9%)在91克水中加入0.9克的氯化鈉. 3.磷酸鹽緩沖溶液的配制:PH7.6,0.2M磷酸鹽緩沖溶液,一般用Na2HPO4.H2O,35.61克/升和NaH2PO4.2H2O31.21克/升,前者加87.0ml,后者加13.0ml混合后即為PH=7.6緩沖溶液,如果用K2HPO4.3H2O為45.644g/升,NaH2PO4.2H2O為31.21克/升,仍是前者87.0ml,后者13.0ml混合后即得. 4.冷卻劑:在本工藝中有使用-15度低溫,一般用如下配方:用33克食鹽加入100克雪或碎冰,以此比例配成混合體可達(dá)-21.3度。 四.工藝流程： (一)除血紅蛋白 1.血液抗凝處理,在新鮮牛,馬,豬血中迅速加入ACD1號(hào)抗凝劑,并緩慢攪勻,每7毫升血液中加入抗凝劑1毫升或2號(hào)抗凝劑. 2.把抗凝處理的血液放入離心機(jī),以3000r/min離心約15--20分鐘,用吸管把上清液(黃色血清)小心吸去拋掉,下層的紅血球用2--3倍生理鹽水洗2--3次,在每一次洗滌中,用離心機(jī)以3000r/min離心,7--8分鐘,反復(fù)操作后,得到洗滌血紅細(xì)胞,洗滌后的血紅細(xì)胞在-15度下冷凍可保存半年并不影響產(chǎn)率和比活,在血液量大,處理不完時(shí)必須這樣做. 3.在洗凈的紅血球中加入等體積去離子水,劇烈攪拌30分鐘,使紅血球細(xì)胞壁砍碎,以使其內(nèi)的SOD浸出.最好在0--4度靜止過夜后,把溶血進(jìn)行有機(jī)提取. 4.接著向溶血中緩緩加入0.2--0.25倍體積的預(yù)冷(-15度)95%乙醇和0.1--0.15倍預(yù)冷氯仿,攪拌10--
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