一種制備木蝴蝶苷a的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，公開了一種制備木蝴蝶苷A的簡便方法。該方法是以黃岑苷為起始原料，利用一鍋兩步法合成木蝴蝶苷A，該方法所用試劑為實驗室常用試劑，且反應(yīng)中關(guān)鍵步驟的還原反應(yīng)在室溫條件下即可進行，因此，本發(fā)明所需材料易得、成本低廉，且反應(yīng)操作簡單，易于處理，可以大量獲得木蝴蝶苷A，以供醫(yī)藥研發(fā)的使用。
【專利說明】一種制備木蝴蝶苷A的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種制備木蝴蝶苷A的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]黃酮類化合物廣泛分布于蔬菜、水果和草本藥材中，并具有極高的藥用價值，如可抗氧化、抗炎、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等，開發(fā)意義重大。除了一些常見的黃酮醇苷，如槲皮素苷和山柰酚甙已被證明具有良好的生物活性，近年來，黃酮苷也得到了廣泛的研究。例如，一些黃酮苷具有較好的抗腫瘤、消炎、抗瘧原蟲或抗錐蟲等作用。
[0003]從自然植物中提取黃酮苷是其主要來源，但也使其生產(chǎn)成本較高，成為限制其進一步應(yīng)用的一大障礙。為了解決這個問題，蛋白質(zhì)工程、代謝工程和合成生物學(xué)已被應(yīng)用于提高黃酮苷的有效生產(chǎn)率。盡管酶工程、基因工程可以提高產(chǎn)量，但是在實際應(yīng)用中存在種種困難，例如周期長、效率低，副反應(yīng)多、分離純化難等。
[0004]木蝴蝶(Oroxylum indicum)屬紫葳科,始載于《滇南本草》,原名千張紙,是一種常用中藥。其味苦、甘，性涼，入肺、肝、胃經(jīng)，有清肺、利咽、止咳、舒肝、和胃等功效，主治咽痛喉痹、聲音撕啞、咳嗽、肝胃氣痛、瘡瘍久潰不斂、浸淫瘡等。木蝴蝶中的化學(xué)成分主要為黃酮類化合物，如黃岑素(Baicalein),白楊素(Chrysin),木蝴蝶苷A (Oroxin A),木蝴蝶苷B (Oroxin B),木蝴蝶定(Oroxindin),千層紙苷(Tetuin),黃岑苷(Baicalin)等。近年來,木蝴蝶苷的藥用價值受到了越來越多的關(guān)注,其中OroxinA, Oroxin B和Oroxylin A7-0-glucuronide具有抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等功能以及抗金黃色葡萄球菌感染等生理活性。但是由于從木蝴蝶中分離純化Oroxin A, Oroxin B較困難,因此其價格相當(dāng)昂貴,例如Ig純度為97%的Oroxin A需要$1500,嚴(yán)重影響了該類化合物在體內(nèi)體外藥效評價研究等領(lǐng)域的應(yīng)用。
[0005]目前，國內(nèi)外科研人員已采用多種方法來獲得Oroxin系列化合物，如Liu等人采用高速逆流色譜法從天然的木蝴蝶中分離純化得到純度為99.1%的Oroxin A,但是這種方法成本很高，不適用于大量提純(Journal of separat1n science 2010, 33,1058-1063)。Sohng等人通過構(gòu)建具有尿苷二磷酸葡萄糖(UDP-葡萄糖)途徑和糖基轉(zhuǎn)移酶的大腸桿菌菌株，開發(fā)了一種可以從黃酮苷元一黃芩素生物轉(zhuǎn)化為黃芩素-7-0-葡萄糖苷(Oroxin A)的生物合成方法，但是該方法容易產(chǎn)生非常復(fù)雜的副產(chǎn)物，給分離純化帶來了諸多困難(Process B1chemistry 2013, 48, 1744-1748)。因此，是否能通過化學(xué)合成從根本上解決這些問題，開發(fā)一種簡潔的合成路線來大量合成Oroxin A，成為當(dāng)前亟待解決的問題。
[0006] 根據(jù)黃酮苷的生源途徑，我們發(fā)現(xiàn)黃芩苷(Baicalin)和Oroxin A幾乎具有相同的結(jié)構(gòu)，Baicalin是黃岑素-7-0-匍萄糖醒酸昔,而Oroxin A是黃岑素-7-0-匍萄糖昔。黃芩苷是從黃芩根中提取分離出來的一種黃酮類化合物，是黃芩的主要有效成分，含量占10%以上，因此，其來源非常豐富，價格便宜，以baicalin作為起始原料用來合成Oroxin A，可有效解決Oroxin A原料不足的難題，同時也可為其他同類化合物的合成提供新的解決思路和方案。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種制備木蝴蝶苷A的方法，針對現(xiàn)有各種方法制備和提取木蝴蝶苷A較困難，例如收率低，提取成本高等缺點，我們進行了本發(fā)明。本發(fā)明的目的在于提供一種半合成制備木蝴蝶苷A的方法，其特征在于極大地提高了收率，降低了生產(chǎn)成本。
[0008]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種制備木蝴蝶苷A的方法，是以黃岑苷為起始原料，經(jīng)一鍋兩步法獲得所述木蝴蝶苷A。
[0009]包括以下步驟:
1)將黃岑苷于有機醇中溶解，0°c下加入無機酸作為催化劑，混勻后加熱回流反應(yīng)2-4小時，溶液顏色開始變黃后點TLC板確定反應(yīng)程度，待確定反應(yīng)結(jié)束后將得到的黃色液體冷卻至室溫；
2)(TC下，在步驟I)得到的黃色液體中分批加入還原試劑，再置于室溫下反應(yīng)1-4小時；
3)步驟2)反應(yīng)結(jié)束后加入乙酸乙酯或丙酮，繼續(xù)反應(yīng)10-60分鐘，再將反應(yīng)液旋干，加入乙酸乙酯和體積分?jǐn)?shù)為10%的醋酸水溶液，攪拌后得到大量黃色固體，抽濾得到粗產(chǎn)物木蝴蝶苷A ；
4)將粗產(chǎn)物用有機溶劑進行重結(jié)晶后，抽濾得到高純度的木蝴蝶苷A。
[0010]步驟I)所述有機醇為實驗室常用醇溶液，包括甲醇、乙醇、異丙醇；所述無機酸為實驗室常用無機酸，包括濃鹽酸、濃硫酸、濃硝酸、濃磷酸。
[0011]步驟2)所述還原試劑為硼氫化鈉、硼氫化鉀、硼氫化鋰，或硼氫化鈉與氯化鋰按摩爾比1:1混合所得。
[0012]步驟4)所述有機溶劑為甲醇或乙醇。
[0013]本發(fā)明的顯著優(yōu)點在于:針對現(xiàn)有方法制備和提取木蝴蝶苷A出現(xiàn)的收率低、提取成本高等問題，本發(fā)明提供了一種半合成制備木蝴蝶苷A的方法，是以黃岑苷為起始原料，利用一鍋兩步法合成木蝴蝶苷A，該方法所用試劑為實驗室常用試劑，且反應(yīng)中關(guān)鍵步驟的還原反應(yīng)在室溫條件下即可進行，因此，本發(fā)明所需材料易得、成本低廉，反應(yīng)操作簡單，易于處理，且提取率較高，可以大量獲得木蝴蝶苷A，以供醫(yī)藥研發(fā)的使用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1為本發(fā)明的合成路線。

【具體實施方式】
[0015]為了使本發(fā)明所述的內(nèi)容更加便于理解，下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明所述的技術(shù)方案做進一步的說明，但是本發(fā)明不僅限于此。
[0016]實施例1
一種制備木蝴蝶苷A的方法，包括以下步驟:1)在10mL燒瓶中加入0.9g黃芩苷和50mL乙醇，(TC下滴入催化量的濃硫酸，將反應(yīng)瓶置于油浴中，加熱回流反應(yīng)2小時；溶液顏色開始變黃后點TLC板確定反應(yīng)程度，待確定反應(yīng)結(jié)束后將得到的黃色液體冷卻至室溫；
2)0°C下，在步驟I)的黃色液體中分批加入380mg還原試劑硼氫化鈉，置于室溫下反應(yīng)I小時；
3)步驟2)反應(yīng)結(jié)束后加入5mL乙酸乙酯，室溫繼續(xù)反應(yīng)20分鐘，將反應(yīng)液旋干，再加入5mL乙酸乙酯和5mL體積分?jǐn)?shù)為10%的醋酸水溶液，攪拌后得到大量黃色固體，抽濾得到粗產(chǎn)物木蝴蝶苷A ；
4)將粗產(chǎn)物用1mL甲醇進行重結(jié)晶后，抽濾得到淡黃色固體顆粒0.65g，收率為75.2%。
[0017]實施例2
一種制備木蝴蝶苷A的方法，包括以下步驟:
1)在10mL燒瓶中加入0.9g黃芩苷和50mL甲醇，(TC下滴入催化量的濃硫酸，將反應(yīng)瓶置于油浴中，加熱回流反應(yīng)3小時；溶液顏色開始變黃后點TLC板確定反應(yīng)程度，待確定反應(yīng)結(jié)束后將得到的黃色液體冷卻至室溫；
2)0°C下，在步驟I)的黃色液體中分批加入380mg還原試劑硼氫化鈉，置于室溫下反應(yīng)2小時； 3)步驟2)反應(yīng)結(jié)束后加入5mL乙酸乙酯，室溫繼續(xù)反應(yīng)10分鐘，將反應(yīng)液旋干，再加入5mL乙酸乙酯和5mL體積分?jǐn)?shù)為10%的醋酸水溶液，攪拌后得到大量黃色固體，抽濾得到粗產(chǎn)物木蝴蝶苷A ；
4)將粗產(chǎn)物用1mL乙醇進行重結(jié)晶后，抽濾得到淡黃色固體顆粒0.54g，收率為62.5%。
[0018]實施例3
一種制備木蝴蝶苷A的方法，包括以下步驟:
1)在10mL燒瓶中加入0.9g黃芩苷和50mL甲醇，(TC下滴入催化量的濃硫酸，將反應(yīng)瓶置于油浴中，加熱回流反應(yīng)2小時；溶液顏色開始變黃后點TLC板確定反應(yīng)程度，待確定反應(yīng)結(jié)束后將得到的黃色液體冷卻至室溫；
2)0°C下，在步驟I)的黃色液體中分批加入540mg還原試劑硼氫化鉀，置于室溫下反應(yīng)3小時；
3)步驟2)反應(yīng)結(jié)束后加入5mL乙酸乙酯，室溫繼續(xù)反應(yīng)30分鐘，將反應(yīng)液旋干，再加入5mL乙酸乙酯和5mL體積分?jǐn)?shù)為10%的醋酸水溶液，攪拌后得到大量黃色固體，抽濾得到粗產(chǎn)物木蝴蝶苷A ；
4)將粗產(chǎn)物用1mL甲醇進行重結(jié)晶后，抽濾得到淡黃色固體顆粒0.60g，收率為
69.4%。
[0019]實施例4
一種制備木蝴蝶苷A的方法，包括以下步驟:1)在10mL燒瓶中加入0.9g黃芩苷和50mL甲醇，(TC下滴入催化量的濃硫酸，將反應(yīng)瓶置于油浴中，加熱回流反應(yīng)4小時；溶液顏色開始變黃后點TLC板確定反應(yīng)程度，待確定反應(yīng)結(jié)束后將得到的黃色液體冷卻至室溫；2)0°C下，在步驟I)的黃色液體中分批加入380mg硼氫化鈉和420mg氯化鋰，置于室溫下反應(yīng)I小時；
3)步驟2)反應(yīng)結(jié)束后加入5mL乙酸乙酯，室溫繼續(xù)反應(yīng)60分鐘，將反應(yīng)液旋干，再加入5mL乙酸乙酯和5mL體積分?jǐn)?shù)為10%的醋酸水溶液，攪拌后得到大量黃色固體，抽濾得到粗產(chǎn)物木蝴蝶苷A ；
4)將粗產(chǎn)物用1mL甲醇進行重結(jié)晶后，抽濾得到淡黃色固體顆粒0.62g，收率為71.8%。
[0020]將實施例中所得的淡黃色固體進行氫譜1H-NMK碳譜13C_NMR、高分辨率質(zhì)譜及高效液相色譜HPLC測定，確定為木蝴蝶苷A，其含量均大于99%，相關(guān)測定數(shù)據(jù)如下:
1H-NMR (400 MHz,DMS0-1/6):12.57 (s, 1H)，8.59 (s, 1H)，8.08 (d, 2H, / = 8.0Hz), 7.57-7.63 (m, 3H)，7.04 (d, 2H, J = 16.0 Hz), 5.42 (d, 1H, / = 4.0 Hz)，5.16 (d, 1H, / = 4.0 Hz)，5.11 (d, 1H, / = 4.0 Hz)，5.02 (d, 1H, / = 8.0 Hz)，4.68 (t, I H, / = 4.0 Hz)，3.74-3.78 (m, 1H)，3.48-3.52 (m, 2H)，3.18-3.24 (m,1H)。
[0021]13C-NMR (100 MHz，DMSO-J6):183.1，164.0, 152.1，149.7，147.0, 132.5，131.3， 131.1， 129.6， 126.9， 106.6， 105.2， 101.5， 94.8, 77.8, 76.4, 73.7,
70.2，61.2.。
[0022]HRMS (ESI) calcd for C21H19O10:431.0984 (Μ-Η), found 431.0973。
[0023]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種制備木蝴蝶苷A的方法，其特征在于:以黃岑苷為起始原料，經(jīng)一鍋兩步法獲得所述木蝴蝶苷A。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備木蝴蝶苷A的方法，其特征在于:包括以下步驟: 將黃岑苷于有機醇中溶解，0°C下加入無機酸作為催化劑，混勻后加熱回流反應(yīng)2-4小時，待反應(yīng)結(jié)束后將得到的黃色液體冷卻至室溫； 2)0°C下，在步驟I)得到的黃色液體中分批加入還原試劑，再置于室溫下反應(yīng)1-4小時； 3)步驟2)反應(yīng)結(jié)束后加入乙酸乙酯或丙酮，繼續(xù)反應(yīng)10-60分鐘，再將反應(yīng)液旋干，加入乙酸乙酯和體積分?jǐn)?shù)為10%的醋酸水溶液，攪拌后得到黃色固體，抽濾得到粗產(chǎn)物木蝴蝶苷A ; 4)將粗產(chǎn)物用有機溶劑進行重結(jié)晶后，抽濾得到高純度的木蝴蝶苷A。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備木蝴蝶苷A的方法，其特征在于:步驟I)所述有機醇為實驗室常用醇溶液，包括甲醇、乙醇、異丙醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備木蝴蝶苷A的方法，其特征在于:步驟I)所述無機酸為實驗室常用無機酸，包括濃鹽酸、濃硫酸、濃硝酸、濃磷酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求 1所述制備木蝴蝶苷A的方法，其特征在于:步驟2)所述還原試劑為硼氫化鈉、硼氫化鉀、硼氫化鋰，或硼氫化鈉與氯化鋰按摩爾比1:1混合所得。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備木蝴蝶苷A的方法，其特征在于:步驟4)所述有機溶劑為甲醇或乙醇。
【文檔編號】C07H1/00GK104072557SQ201410329611
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年7月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月11日
【發(fā)明者】陳海軍, 何桂華, 李財龍, 董龍嶸, 謝曉波, 王旋旋, 高瑜 申請人:福州大學(xué)