葉酸-葡聚糖綴合物及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了葉酸-葡聚糖綴合物及其制備方法，該方法包括，合成琥珀?；暇厶牵缓铣砂坊~酸類似物；以及，合成葉酸-葡聚糖綴合物。本發(fā)明還公開了該葉酸-葡聚糖綴合物制備藥物組合物的應用等。
【專利說明】葉酸-葡聚糖綴合物及其應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明是中國專利申請第201210543504.9號分案的發(fā)明，享有2012年12月14
目的申請日。
[0002]本發(fā)明屬于藥物制劑領域，具體而言，本發(fā)明涉及葉酸-葡聚糖綴合物，該葉酸-葡聚糖綴合物能提升用其包裹的藥物化合物(如，紫杉醇)的理化性質，甚至可以協(xié)同起效，并能提高藥物的耐受性。另外，本發(fā)明還涉及該葉酸-葡聚糖綴合物制備藥物組合物的應用及其制備方法等。
【背景技術】
[0003]目前臨床使用的大多數(shù)抗癌藥物，如紫杉醇，Docetaxel(多西他賽)，阿霉素等在生理鹽水中的溶解度比較差，無法在臨床上直接使用，需要一些輔料配合。例如，Taxol?,用聚氧乙烯蓖麻油和乙醇的混合物來配制紫杉醇，Taxotere? (泰索帝)用聚山梨酯和乙醇來配制，但是都會引起強烈的副作用，如過敏反應、腎臟毒性、神經和心臟毒性等；最近的Abmxane?.使用血清白蛋白為載體來配制紫杉醇，毒副作用也明顯降低，然而血清白蛋白無論是提取還是DNA重組獲得，純化難度大，造成成本居高不下，一個劑量就需US$5，100，而一個療程需要至少3劑，無法在我國推廣。
[0004]日本專利JP2010126533A披露了，把紫杉醇與葡聚糖等共價綴合在一起，然后再通過非共價吸附在藥物顆粒表面固定葉酸，以達到靶向抗腫瘤的目的，然而本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，紫杉醇作為藥效活性化合物，與葡聚糖綴合，尤其是與葡聚糖上大量基團的副反應，由于化學結構的改變，會顯著降低紫杉醇的藥效，如果要消除結構相近的副產物，需要復雜的純化過程(如層析過柱)，成本降不下來，而且葉酸吸附在表面，容易洗脫。中國專利20121002970.5公開了共價結合的葉酸-葡聚糖-氧化鐵納米顆粒，其具有體外靶向作用，其沒有報道這種顆粒本身的抗腫瘤效果(實際基本沒有)，而且本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)其是先合成葡聚糖-氧化鐵納米顆粒，然后再進行葉酸綴合，合成效率低，且輔料對藥物的適應性喪失。
[0005]為此，本發(fā)明人經過艱苦的研究，并結合一些運氣，偶然發(fā)現(xiàn)通過一些連接基團將葉酸直接共價結合到 葡聚糖上，雖然一定程度上喪失了葉酸對腫瘤的靶向性，目前其經測試體外沒有抗腫瘤細胞的毒性(活性)，但是卻能夠很穩(wěn)定地非共價地包裹住諸如紫杉醇等藥物，復溶性和穩(wěn)定性俱佳，且不必改變紫杉醇的化學結構，還無需使用復雜的純化工藝(如，柱層析)。更令人意想不到的是，該輔料本身雖然沒有體外抗腫瘤細胞的毒性，但是能夠協(xié)同紫杉醇起效，提高體內的抗腫瘤的效果，并且能提高受試動物的藥物耐受性，使得在臨床使用中可以更大劑量地給藥，從而進一步提高抗腫瘤效果。

【發(fā)明內容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供新的葉酸-葡聚糖綴合物，該葉酸-葡聚糖綴合物包裹藥物的適應性良好，無需復雜的純化工藝，包裹形成的藥物組合物復溶性和穩(wěn)定性俱佳，甚至可以與紫杉醇等協(xié)同起效，并能提高藥物的耐受性。另外，本發(fā)明還提供了該葉酸-葡聚糖綴合物制備藥物組合物的應用及其制備方法等。
[0007]具體而言，在第1方面，本發(fā)明提供了葉酸-葡聚糖綴合物，其由如下制備方法制備而得，該方法包括，
[0008](I)合成琥珀?；暇厶牵?br> [0009](2)合成胺基化葉酸類似物，所述胺基化葉酸類似物是如下化合物
[0010]
【權利要求】
1.葉酸-葡聚糖綴合物，其由如下制備方法制備而得，該方法包括，(1)合成琥珀?；暇厶?；(2)合成胺基化葉酸類似物，所述胺基化葉酸類似物是如下化合物


2.權利要求1所述的葉酸-葡聚糖綴合物，其中所述方法包括，(1)按流程式I合成琥珀?；暇厶?
3.權利要求1所述的葉酸-葡聚糖綴合物，其中所述方法包括，(1)取平均分子量20KDa、Mw/Mn= 1.3的葡聚糖10.0g溶于無水DMF中，攪拌20分鐘形成澄清的溶液，然后加入1670mg琥珀酸酐和200.0mg4_ 二甲基氨基吡啶(DMAP)，快速攪拌至所有的固體溶解；置于室溫下使得整個反應液反應24小時，之后將反應液放入截留分子量3，500的Spectra/Por3透析袋中，置于水中透析2天；然后將透析袋中的溶液冷凍干燥，得到白色的琥珀?；暇厶牵? (2)取3g葉酸溶于120mLDMSO中，向其中加入930mg DCC和770mgNHS，反應液在室溫暗室處放置12小時，然后副產物D⑶沉淀被過濾去除，再向反應液加入1000mL V: V =30: 70的丙酮/乙醚混合液并進行攪拌，收集黃色沉淀并用V: V = 30: 70的丙酮/乙醚混合液洗滌后晾干；取2.78g晾干的黃色沉淀再溶于20mLDMS0中，取6.0lg乙二胺快速加入到該溶液中，將兩者混合后在室溫暗室處放置12小時，加入50mL V: V = 30: 70的丙酮/乙醚混合液并進行攪拌，收集黃色沉淀并在DMSO溶液中重結晶提純，獲得胺基化葉酸類似物； (3)取步驟⑴制備的琥珀酰化葡聚糖2000mg溶于40ml無水DMF中，加入50mgDMAP和579.7mg DCC,在室溫下放置12小時后，再加入2mL含300mg步驟(2)制備的胺基化葉酸類似物的EDC溶液，反應液在室溫下攪拌12小時后，將反應液放入截留分子量3，500的Spectra/Por3透析袋中，置于水中透析2天；然后將透析袋中的溶液冷凍干燥，得到黃色的葉酸-葡聚糖綴合物。
4.權利要求1~3之任一所述的葉酸-葡聚糖綴合物的制備方法，其包括權利要求1~3之任一中所述的制備步驟。
5.權利要求1~3之任一所述的葉酸-葡聚糖綴合物在制備含有脂溶性藥物化合物(優(yōu)選是紫杉醇)的藥物組合物(優(yōu)選是注射劑，更優(yōu)選是凍干粉針劑)中的應用。
6.權利要求5所述的應用，其中制備的方法包括，` (4)將藥物化合物混合(優(yōu)選用高速勻漿機混合)入含權利要求1~3之任一所述的葉酸-葡聚糖綴合物的溶液中，形成含納米級顆粒的溶液；和， (5)任選向步驟(4)的產物加入藥學上可接受的輔料(如，甘露醇)和/或進行干燥(如，冷凍干燥)。
7.權利要求6所述的應用，其中制備的方法不包括層析步驟。
8.權利要求6所述的應用，其中藥物化合物是脂溶性藥物化合物，優(yōu)選是紫杉醇。
9.權利要求6所述的應用，其中步驟(4)中的納米級顆粒是粒徑小于200nm(優(yōu)選是小于180nm)的顆粒。
10.權利要求6所述的應用，其中步驟(4)中的藥物化合物和葉酸-葡聚糖綴合物的重量比為0.5~2: I~10，優(yōu)選為0.8~1.2: 3~6，如1: 4。
【文檔編號】A61K31/337GK103864955SQ201410060493
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2012年12月14日 優(yōu)先權日:2012年12月14日
【發(fā)明者】李軍, 游紹進, 陳瓊 申請人:蘇州友林生物科技有限公司